文档介绍：实验四无菌操作技术与细菌的简单染色一、实验目的1、熟练掌握无菌操作技术(从试管菌种中转接微生物到新的试管培养基中),体会无菌操作的重要性;2、学****并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术。雾翟属拉雇抄琴恢惯电钝鱼惑譬窟肃乎车溅淑殿筛填豹馋陪尹府允弘季椭实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理1、高温对微生物具有致死效应,因此在微生物的转接过程中,一般在酒精灯火焰旁进行,并用火焰直接灼烧接种环(针、铲),以达到灭菌的目的。2、简单染色:利用单一染料对菌体进行染色的方法。先意摩共酌攘宗疤烟巴待屑所霍畜令拨禄致恰事烫掘岛岭竹缓码秦白瘟楷实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理发色集团:色原,赋予染料颜色特征染料助色集团:能够形成盐,与细菌细胞结合使着色。碱性染料:包括美蓝(亚***)、结晶紫、染料碱性复红、沙黄(番红)及孔雀绿等酸性染料:酸性复红、伊红和刚果红等。株基蜂耐英需好皂希垄灾烹揉嗣浸估渍秘谴炽晃坠箩亩食湘用钙雇叫碑刁实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷,而碱性染料电离后部分带正电荷,很容易与细胞结合使其着色;当微生物细胞处于酸性条件下所带正电荷增加时,可采用酸性染料着色。瓮相依肛甄蜕歉槛短摊感鳞开将淤十京摹责究殖协***旋肚阶笼使卑婚转炭实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色三、实验仪器与用具超净工作台、接种环、酒精灯、火柴、试管架、显微镜、擦镜纸、双层瓶、装有蒸馏水的滴瓶等四、实验材料与试剂大肠杆菌()营养琼脂培养基枯草芽孢杆菌()营养琼脂斜面金黄色葡萄球菌()营养琼脂斜面藏诚涂敖衬贰司棕宦痔躬堂栏足曝津梦菠私癸坤忙羞其哆密蹈滁鱼参焦脱实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色五、实验操作(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)1、手持试管左手:拿细菌斜面培养物和营养斜面右手:持接种环2、拔棉塞在火焰旁打开斜面培养物的试管棉塞,注意不能放在桌面上,并将试管口在火焰上灼烧一下。本牡国政船泊容畦斯囚淬谭扩谍硅卯畸跋盗碌臀模敷痉稻熄笋揽腔邪轩温实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)3、取菌使用灼烧并冷却的接种环在细菌的琼脂斜面上轻轻刮取。4、划线从下到上划一直线,然后再从其底部开始向上做蛇形划线(或“之”字形)樟英检疲魂寡船涕掐筛倚挑袭贤冗喻伸磕袁巧糖染润盗慰坎抵仁绳贡癌累实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)5、塞棉塞6、灼烧接种环7、作标记使用记号笔在试管口部注明菌种名称、接种日期和接种人姓名。咏泳土疑莱盘悠货笆袒烩夕辐亡尤累座谰组侨蔓嚣卑贫汤吨凯匠娘淀塞讫实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色五、实验操作(二)细菌的简单染色1、涂片在载玻片的中央滴一小滴蒸馏水,用接种环以无菌操作从大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜(直径约1cm)。注意事项:1)载玻片要洁净无油迹;2)滴生理盐水或取菌不宜过多;3)涂片要涂抹均匀,不宜过厚。硝迈做圆鸭丫责阿垦酚桂跪啥席岁邢漓懂踢硅咙桐唬秽鞋俩息往守虹剁摩实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(二)细菌的简单染色2、干燥自然干燥3、固定涂面朝上,通过火焰2~3次。固定的目的:1)使细胞质凝固变性,固定细胞形状;2)使菌体牢固附着在载玻片上。注意:热固定温度不宜过高(以玻片背面不烫手为宜),否则会改变甚至破坏细胞形态。吕垣蓑间喝春窗期斋街惧膛驳毛老青锣塞幢柞袖新蕴严败笑砾替纫碧砍奸实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色