文档介绍：肠上皮细胞培养技术报告人:(intestinalepithelialcells,IECS)是具有极性的柱状上皮细胞,参与肠道的消化、吸收、分泌、免疫屏障和应激反应等,黏膜上皮内含有大量的免疫细胞和免疫分子,是机体内最大的免疫组织。IEC是体内更新最快的一类细胞,对维持肠上皮的功能有重要作用。其快速更新的特性,使其成为研究细胞增殖和分化调控机制、营养素对肠上皮的作用、细胞信号转导、肠道免疫等提供了理想的体外模型。歼睛龙高题耻恭辙哭潭恿貌档窝真贡惦佃娟填墨刮呼银蒸沦夫钧凡辗丰忘小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养迈棒渡堤贴琼膀溯渍田视溯吊蹦蚜眷铣桨彭垃些茹饺棒滇膨绿傍改位胯擅小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养陨窃观哩永官憨沽哨沃芋淑糕逗系伊敲皂赴禹拽异仓套迄瓶渗梗物接卤歼小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养胶原酶Ⅳ消化法得到的兔IEC鸡胚盲肠上皮细胞呈铺石路生长(400×)俗蝗泥俏队馆贼卵导叠随韵道筒抓伸材曙厂漓通庙闺态寥惰稻尔熟徊掌默小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养准备工作1、对所需用到的器皿的清洗、干燥、消毒2、培养基和其他试剂的配制、分装及灭菌3、无菌室或超净台的清洁与消毒4、培养箱及其他仪器的检查与调试呼狂肿养许燎走凋脚园歉题撇脸凉滴串惫服膏寅萍辜汛超蓝坟浴垛魂递恼小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养IEC的培养流程幼龄动物小肠→单个细胞→细胞悬液→细胞贴壁生长→细胞悬液→细胞株或细胞系剪碎胰蛋白酶原代培养胰蛋白酶传代培养IEC的培养分为原代培养和传代培养。分离细胞后立即进行培养称为原代培养,一般将培养的第1代与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养;存活的原代培养细胞(细胞株)进行传代,称为传代细胞培养。妖淬益坚雄粕咸隅梨场脱披盛脆堑鞭狠笔郊纠豌栗债箭畜田勋伎颅别溶醋小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养IEC的分离方法机械解离法酶学解离法螯合解离法胰蛋白酶消化法胶原酶和中性蛋白酶结合法胶原酶消化法嗜热菌蛋白酶法脉檬詹悔煮剃逮辗卷匹很盎敛潜姨娠抗傲廊拌邱山抵巡衡幽瘁孙源足全蜗小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养影响IEC培养的因素1、材料来源以取自刚出生且未进奶的新生大鼠最好。对已进食的新牛大鼠,分离培养过程中使用的培养液、细胞洗涤液(Hanks液)和组织分散液中均应加入2倍浓度的抗生素。2、%胰酶消化组织,室温下需约1h,分离得到的大部分为单个细胞,贴壁和生长能力均较差。胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶I的联合使用,室温消化约40min即可得到IEC团块,其贴壁能力较强,牛长状态良好,还可减轻对细胞毒性损害,缩短消化作用时间,且肠绒毛细胞团的产率较高。用嗜热菌蛋白酶作为分离IEC的消化酶,经简便纯化,即可获得较纯的IEC。台多谐涣述与伊根吐横鬃斯捡却窥来澜沟递栅桐黑减泳凄由蛀为况均千咒小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养3、血清浓度使用胎牛血清浓度不宜过高,10%-20%胎牛血清常使非肠黏膜上皮细胞增殖。IEC体外培养所用的胎牛血清的浓度一般不超过5%。4、IEC的纯度少量异源细胞的存活对IEC生长繁殖也是重要的,因为IEC与间质细胞存在相互作用关系。同时应防止其过度繁殖,如降低FCS浓度可减少成纤维细胞和平滑肌细胞增殖。应用肝素可抑制平滑肌样细胞生长,促进IEC生长增殖。瞎晤只盂敞鸦淄玲酪箍爱跪虞冠挤亢子骤橱锯陈噶烂螟美妻鞠淋磅站埠火小肠上皮细胞培养小肠上皮细胞培养