文档介绍：分类号:A14 单位代码:
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学位论文
基于流感病毒HA2蛋白通用型疫苗
的初步研究
硕士研究生:
导师: 研究员
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
国家流感中心
申请学位级别:硕士研究生专业名称:病原生物学
论文提交日期:2012年6月论文答辩日期:2012年6月
学位授予单位:中国疾病预防控制中心学位授予日期:2012年月
答辩委员会主席:
评阅人:
二零一二年六月北京
学位论文
基于流感病毒HA2蛋白通用型疫苗
的初步研究
研究生姓名:
导师: 研究员
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
申请学位级别:硕士研究生
专业名称:病原生物学
学位授予单位:中国疾病预防控制中心
2012年6月
学位论文原创性、真实性声明
本人郑重声明:《基于流感病毒HA2蛋白通用型疫苗的初步研究》是本人在中国疾病预防控制中心《病原生物学》专业攻读硕士学位期间,在导师指导下完成的硕士学位论文。我承诺:本论文中所涉及的所有数据、试验记录以及研究结果均真实可信,引用资料已注明出处,无剽窃、篡改、抄袭之行为。如本论文原创性方面出现问题,我愿负法律责任。
本课题的研究成果归中国疾病预防控制中心所有,发表文章的单位署名为中国疾病预防控制中心。
特此声明!
学位论文作者(签名): 研究生导师(签名):
2012年 6月11 日 2012年6月11日
目录
摘要 3
Abstract 3
前言 3
第一章pET30a-HBc-LCR质粒的构建 3
第一节材料与方法 3
一、材料 3
二、方法 3
第二节结果 3
一、质粒pET30a-LCR-HBc的构建示意图 3
二、LCR-HBc基因的优化 3
三、阴性对照克隆质粒Topo-HBc的构建结果 3
四、表达质粒pET30a-LCR-HBc与pET30a-HBc的酶切鉴定结果 3
第三节小结 3
第二章 LCR-HBc融合蛋白和HBc蛋白的表达与纯化 3
第一节材料与方法 3
一、材料 3
二、方法 3
第二节结果 3
一、LCR-HBc融合蛋白和HBc蛋白可在大肠杆菌原核表达系统中高效表达 3
二、Ni柱亲和层析纯化目的蛋白 3
三、目的蛋白的定量 3
四、电镜观察VLP的形成: 3
第三节小结 3
第三章小鼠实验及免疫效果评价 3
第一节材料与方法 3
一、材料 3
二、方法 3
第二节结果 3
一、H5N1 HA特异性抗体IgG水平明显增高 3
二、 ELISPOT检测IFN-γ的产生 3
三、 LCR-HBc组小鼠肺病毒载量明显降低 3
四、 LCR-HBc疫苗组小鼠肺病理相对较轻 3
五、小鼠的体重变化以及生存曲线 3
第三节小结 3
讨论 3
结论 3
参考文献 3
综述 3
致谢 3
基于流感HA2蛋白通用型疫苗的初步研究
硕士研究生杨星钰
导师舒跃龙研究员
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
摘要
无论是流感大流行还是每年的季节性流感流行,都给人类健康带来巨大威胁,2009年甲型H1N1流感大流行再一次证明了这一点。流感疫苗接种是防控流感最重要的手段,由于流感病毒高度的变异性,流感疫苗的生产需要根据全球流感监测结果经常更换疫苗株,但由于目前对流感病毒变异预测的手段往往有限,往往会导致疫苗株与流行株不匹配,从而降低疫苗的保护率,通用型疫苗即能够对抗多种亚型流感病毒或流感变异株的疫苗,其保护效果不受流感病毒变异的影响,也不需要更换疫苗株,是目前流感疫苗研究领域的热点。本课题主要利用乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B Core Antigen, HBc)蛋白可以形成病毒样颗粒(Virus Like Particle,VLP)的特点,将流感病毒的HA2 的76-130AA线性保守区(Linear Conserved Region, LCR)与HBc融合表达,对所得到的VLP疫苗进行免疫学评价,希望能够得到一种可以提供交叉保护的流感通用型疫苗。
本课题的研究目的:
利用HBc VLP载体平台表达流感病毒LCR,构建形成VLP疫苗。
对所构建的LCR-HBc VLP疫苗进行免疫学评价,通过动物实验研究其交叉保护效果。
研究内容:
从A/Hubei/1/2010(H5N1)HA2基因序列出发,连同HBc基因按照大肠杆菌偏好的密码子进行优化,优化后的LCR-HBc基因全基因合成,将合成的基因插入到pET30a原核表达载体中,通过大肠杆菌原核系统表达该融合蛋白。
将经过Ni柱亲和层析纯化后的LCR-HBc VLP免疫小鼠,通过两次免疫后