细胞周期相关蛋白在肝癌细胞系HCC┐9204表达的免疫细胞化学定位.doc

文档介绍：┐9204表达的免疫细胞化学定位
作者:杨连君王文亮司晓辉
【关键词】细胞周期相关蛋白
关键词: 细胞周期相关蛋白;肝细胞癌;免疫细胞化学
0 引言
肿瘤细胞的发生和增殖与细胞周期蛋白(Cyclin)及其相关分子Cyclin依赖性蛋白激酶(CDK)和CDK抑制蛋白(CKI)的调控密切相关[1] .关于Cyclin及其调控分子在培养的原发性肝细胞癌(以下简称肝癌) -9204中的表达情况.

1 材料和方法

细胞来源-・L-1 ,取出玻片,PBS缓冲液洗,950mL・L-1 乙醇固定15min,再用PBS洗后4℃备用.

主要试剂鼠抗人Cyclin D1,CDK4和p27Kip1mAb均为美国Santa .

染色方法①・L-1 H2 O2 内,37℃,10min;②加正常羊血清,37℃,30min;③分别加鼠抗人Cyclin D1,CDK4或p27Kip1mAb,以PBS作为阴性对照,4℃过夜;④加生物素化羊抗鼠IgG,37℃,30min;⑤加ABC复合物,37℃,;⑥DAB显色后脱水,透明,封片.

,计数300个细胞,观察其是否为阳性及其染色部位.

2 结果
Cyclin D1,-9204细胞表达的阳性率及其定位情况见表1、图1和图2.-9204细胞中的表达情况相比,QZG细胞中的Cyclin D1和CDK4相对较弱,.
表1 Cyclin D1,-9204细胞表达的阳性率和定位情况略

图1 略

3 讨论
细胞周期的内源性调控主要是通过Cyclin-CDK- D1是Cyclin中与细胞周期G1期密切相关的主要类型,,Cy-clin D1在多种肿瘤组织中呈异常的高表达[2,3] .,,在多种肿瘤组织中呈异常的低表达[4] .在我们的研究中,肝癌细胞中的Cyclin D1和CDK4强于正常肝细胞对照,而p27Kip1相对较弱, D1表达主要为细胞核阳性[2] .- D1与CDK相互作用是细胞核事件,,肝癌细胞的p27Kip1表达主要为细胞质阳性,CDK4主要为细胞核阳性,与以往的报道一