文档介绍：流式细胞术检测九节龙皂甙对Hela细胞凋亡的诱导作用
作者:梁克明王四旺谢艳华王晓娟
【关键词】九节龙皂甙
关键词: 九节龙皂甙;细胞凋亡;流式细胞术;Hela
0 引言
细胞凋亡(Apoptosis)是一种生理性细胞程序化死亡,与肿瘤的发生、发展密切相关,[1] ,我们观察九节龙皂甙诱导Hela细胞凋亡,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行分析,结果如下:
1 材料和方法
细胞系及细胞培养人宫颈癌细胞株(Hela)为上皮样癌细胞,[2].
~・mL-1 九节龙皂甙(本校药物研究所提供)作用Hela细胞(106 ・mL-1 )0~72h,未经过药物处理的细胞为阴性对照组,加入等量培养液(100mL・L-1 胎牛血清的RPMI1640培养液)中细胞常规培养,按作用不同时间,分别收集细胞,经PBS洗涤2次,加入-4℃
700mL・L-1 乙醇固定过夜,离心收集细胞,再经PBS洗涤后,依次加入膜穿孔剂,溴化乙锭(PI)和Rnase4℃染色30min,350目筛网过滤,Epics-profileⅡ流式细胞仪(美国Coulter公司)上进行DNA含量及细胞周期分析.
2 结果
细胞凋亡过程中,核内DNA被降解成寡核苷酸片断,,形成正常二倍体细胞DNA峰(G1 峰)之前的亚二倍体峰,即Apoptosis峰(亦称Ap峰),是凋亡细胞核固缩及DNA降解的结果,・L-1 作用48h后G1 峰前出现凋亡峰,%,而阴性对照组细胞G1