文档介绍：肺癌患者血浆DNA p53基因突变的检测
作者:吕韶敏,刘娟,刘璐,王春秀
【关键词】突变
【关键词】肺癌;血浆DNA;p53基因;突变
1临床资料
200207/200412经病理组织学确诊为肺癌患者18(男13,女5)例,年龄28~70(平均49)岁. 其中非小细胞肺癌10例,小细胞肺癌8例,阳性对照为正常胃粘膜组织DNA,阴性对照为健康献血员新鲜血浆. 采用DNA提取试剂盒,引物据Genbank检索结果设计,PCR使用DNA扩增试剂盒和智能型热循环仪,100 bp DNA梯度以及琼脂糖,产物采用全自动DNA测序仪进行测序. 患者清晨空腹时采集静脉血提取DNA. DNA提取方法参照试剂盒说明,PCR重复循环35次,在 302 nm的紫外灯下观察结果,对于扩增效果较差,不能满足DHPLC分析要求的标本采用二次PCR方法扩增. 采用DHPLC WAVETMDNA片断分析系统,检测靶序列突变,色谱柱为其DNASep分析柱,检测器为紫外分光光度计(波长260 nm). DNA测序样品为PCR扩增产物,同时提供上游引物序列做DNA,PCR产物直接测序分析. 在18例肺癌患者血浆DNA全部可扩增出目的片段,而健康献血员的血浆中无一例扩增出目的片段. 在18例标本中有5例外显子7发生突变,%. 其中小细胞肺癌2例,非小细胞肺癌3例,测序结果证实了DHPLC检测突变的结果.
2讨论
近年来肿瘤预防和早期诊断越来越受到重视,其中基因突变是研究热点,而对p53基因突变研究的最为全面和透彻,p53基因在恶性肿瘤中的突变率较高. 研究发现多数肿瘤患者血浆循环核酸水平较正常人明显升高,提示其在肿瘤的早期诊断和预后判断等方面可能有重要作用[1]. 因此检测血浆DNA对肿瘤的诊断、治疗和预后评估可能有重要价值. 我们对18例肺癌患者的血浆核酸p53基因有高突变的外显子7,采用DHPLC进行突变检测,结果发现有5/18例突变,阳性率为