文档介绍：Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse半微量凯氏定氮法测定蛋白质含量方法原理样品与硫酸一同加热消化,分解有机质,释放出的NH3与硫酸结合成硫酸铵留在溶液中。在定氮消化瓶中,用氢氧化钠中和硫酸铵生成氢氧化铵,加热又分解NH3,用硼酸吸收,用标定过的盐酸或硫酸滴定,从而计算出总氮量,换算为蛋白质量。(二)仪器、   分析天平:;实验用粉碎机;半微量凯氏蒸馏装置;半微量滴定管,容积10毫升;硬质凯氏烧瓶:容积25毫升,50毫升;锥形瓶:容积150毫升;电炉:600瓦。   (1)盐酸:分析纯,,(邻苯二甲酸氢钾法标定);   (2)氢氧化钠:工业用或化学纯,40%溶液(W/V);   (3)硼酸:分析纯,2%溶液(W/V);   (4)硼酸混合指示剂:,%乙醇中,混合后稀至100毫升,将混合指示剂与2%硼酸溶液按 1:100比例混合,,使呈灰紫色,此溶液放置时间不宜过长,需在1个月之内使用;   (5)加速剂:五水合硫酸铜(分析纯)10克,硫酸钾(分析纯)100克在研钵中研磨,仔细混匀,过40目筛;   (6)浓硫酸:,无氮;双氧水:分析纯,30%;蔗糖:分析纯;   (7)双氧水硫酸混合液(简称混液):双氧水、硫酸、水的比例为3:2:1,即在100毫升蒸馏水中,慢慢加入200毫升浓硫酸,待冷却后,将其加入300毫升30%双氧水,混匀,此混液可一次配制500~1000毫升贮藏于试剂瓶中备用,夏天最好放入冰箱或阴凉处贮藏,室温(20℃)上下时不必冷藏,贮藏进间不超过1个月。(三)操作步骤   (带壳种子需脱壳)挑拣干净,按四分法缩减取样,取样量不得少于20克。将种子放于60~65℃烘箱中干燥8小时以上,用粉碎机磨碎,95%通过40目筛,装入磨口瓶备用。   (含氮1~7毫克),,同时测定试样的水分含量。   ,加入加速剂粉末。除水稻为1克外,其它均为2克。然后加3毫升硫酸,轻轻摇动凯氏瓶,使试样被硫酸湿润,将凯氏瓶倾斜置于电炉上加热,开始小火,待泡沫停止后加大火力,保持凯氏瓶中的液体连续沸腾,沸酸在瓶颈中部冷凝回流。待溶液消煮到无微小的碳粒并呈透明的蓝绿色时,谷类继续消煮30分钟,豆类继续消煮60分钟。   ,,在凯氏瓶上放一曲颈小漏斗,倾斜在电炉上加热,开始小火(用调压器将电压控制在175伏左右),保持凯氏瓶中液体呈微沸状态。5分钟后加大火力(将电压控制在200伏左右)。保持凯氏瓶中液体连续沸腾,消煮总时间,水稻、高粱为30分钟,其它均为45分钟。注:消煮中列入两种消煮条件,经与国际谷物化学协会标准法(ICC)比较,t值测验均不显著,准确度与精密度也基本一致,在具体工作中可根据实际情况取其一种。  ,轻轻摇匀。移入半微量蒸馏装置的反应室中,用适量蒸馏水冲洗凯氏瓶4~5次。蒸馏时将冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸指示剂混合液