文档介绍：Ce吐温40色氨酸化学发光体系的研究与应用
【摘要】实验观察到在酸性条件下,色氨酸能够增强Ce和吐温40的化学发光反应,其发光强度的增加与色氨酸含量在一定的范围内呈线性关系,据此建立了测定色氨酸的化学发光分析新方法。采用顺序注射技术进样,将试样和试剂的消耗降至微升范围内,明显提高了分析速度。考察了各种实验参数的影响和可能的反应机理,此反应的发光体为Tween 40的中间氧化产物。在试样体积70 μL、吐温40浓度为5%、试剂Ce体积80 μL、 mmol/L、 mL/min的条件下,×10-7~×10-5 mol/L; 检出限(3σ)×10-8 mol/L; ×10-6 mol/%。%~102%。
【关键词】顺序注射,化学发光,吐温40,色氨酸
1 引言
色氨酸(Trp)是蛋白质中最基本的氨基酸之一,是建立和维持人体内氮平衡的必不可少的一种氨基酸,它也是神经递质的前体,具有重要的生理作用[1]。但色氨酸不能由人体自身合成,需由外界补充,因此建立快速准确测定色氨酸的分析方法十分必要。目前,测定氨基酸的方法多为高效液相色谱分析法。由于在样品预处理的强酸水解过程中色氨酸会被完全破坏,所以多采用碱水解进行预处理,单独进行测定[2]。利用色氨酸在紫外区的特征吸收,用光度分析法测定[3],结合色谱分离[4]及采用化学计量学法分辨[5]提高方法的选择性,或利用色氨酸自身的荧光特性,用荧光光度法检测[6~9]。此外,也有将电化学法[10~12]和化学发光法[13~15]用于色氨酸测定的报道。
本实验发现,在酸性介质中,当有色氨酸存在时,Ce和吐温40(Tween 40)之间的化学发光反应强度明显增强。基于此,将顺序注射(SI)进样和化学发光(CL)检测联用,建立了简便、快速、灵敏、选择性好的测定色氨酸含量的分析方法,采样频率达100样/h,并探讨了可能的反应机理。
2 实验部分
仪器与试剂
mL针筒和两个多位选择阀V1和V2(Valco, Houston, TX, USA)组成;泵和阀的操作由计算机通过FIALab 。检测装置为BPCL微弱发光分析仪(中国科学院生物物理研究所)。 mm 半透明的PTFE管自制而成。Y型三通与阀V1和V2之间连接管路长均为5 cm,测定流路见图1。
氨基酸试剂均购自Sinopharm化学试剂公司。氨基酸储备液( mmol/L): mol/L NaOH溶解配制外,其它各种氨基酸都用水溶解配制,保存在4 ℃冰箱内。 mmol/L Ce溶液( mol/L H2SO4)和10%Tween 40溶液,根据需要适当稀释。以上试剂均为分析纯,水为二次去离子水。
实验方法
首先经泵P1和P2分别吸入一定体积的去离子水作为载流,再通过阀V1和V2分别吸入80 μLCe溶液和70 μL试样溶液到各自储存管路中,然后改变两泵运行方向,推动试剂和试样溶液在T型连接处混合,在反应管路反应,经流通池后排出