文档介绍：实验五一、、交叉配血ABO血型鉴定实验原理正定型根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合出现凝集反应的原理,用已知IgM类特异性标准抗A、抗B血清室温下与被检红细胞在盐水中反应,若出现凝集现象,表明被检红细胞膜上有血型抗体相对应的抗原,来判断和鉴定被检者的血型。反定型用已知标准A,B,O型红细胞分别与被检血清反应,若出现凝集,证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。根据血清中存在的血型抗体和Landsteiner定律判断和鉴定被检者血型。试剂器材试剂标准抗A、抗B血型定型试剂5%(体积比)A,B,O型标准红细胞生理盐水悬液。生理盐水器材试管、试管架、记号笔、吸管、离心机、玻片、显微镜标本5%被检红细胞生理盐水悬液,血清或血浆操作步骤正定型试管法:1:标记试管取试管两支,分别标记抗A,抗B。2:加定型试剂将抗A、抗B试剂各1滴分别加入抗A,抗B试管中。3:加入红细胞悬液各加5%被检者红细胞生理盐水悬液1滴于试管中,混匀,以1000r/min离心1min。4:观察结果先观察上层液有无溶血现象,再斜持试管轻轻摇动或弹动,使管底红细胞再悬浮,观察有无凝集,如仅轻微凝集或不见凝集,必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。5:判断结果凝集判断标准:完全凝集者,上层液无色清亮,底部有红细胞凝块,呈花边状,轻弹试管凝块不散开。完全不凝集的试管,上层液无色清亮,血细胞均匀沉积管底,边缘整齐,重悬细胞后成均匀的红色悬液。试管法:1:标记试管取试管3支,分别标记A,B,O。2:加入样本血清或血浆血样经2500r/min离心3min分离出血浆或血清,在A,B,O试管中分别加1滴血浆或血清,3:加标准红细胞悬液再分别加入5%A型、B型、O型标准红细胞生理盐水悬液各1滴,混匀,以1000r/min离心1min。4:观察结果先观察上层液有无溶血现象,再斜持试管轻轻摇动或弹动,使管底红细胞再悬浮,观察有无凝集,如仅轻微凝集或不见凝集,必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。反定型红细胞的ABO正反定型结果判断正向定型反向定型抗A抗B抗A,BA细胞 B细胞 O细胞-- - + + - O+-+-+-A-+++--B+++---AB判断结果注意事项:,器材干燥洁净,防止溶血,避免交叉污染。,表明存在抗原—抗体反应并有补体激活。~6个月以内婴儿反定型可能不凝集或凝集很弱,年老体弱者抗原较弱,最好用试管法鉴定血型。,凝集较弱。。:①严重的肠道细菌感染出现类B抗原;②血清中存在病理性冷凝集素;③部分高球蛋白与异常球蛋白症患者。毛细血管采血标准操作程序操作步骤1采血部位***以左手无名指内侧为宜,6月以下婴幼儿通常选拇指内侧或足跟两侧采血。2轻轻按摩采血部位。 3用棉签蘸取消毒液消毒局部皮肤、待干。