文档介绍：氨基酸的分析分离为了测定蛋白质中氨基酸的含量、组成或从蛋白质水解液中制取氨基酸,都需要对氨基酸混合物进行分析和分离工作。其方法较多,而目前使用较多的是层析法。(1)分配层析的一般原理:所有的层析系统都有两个相组成,一个为固定相或静相(stationaryphase),一个为流动相或动相(mobilephase)。混合物在两相中的分离决定于混合物的组分在这两相中的分配情况,一般用分配系数(partitionordistributioncoefficient)来描述:当一种溶质在两种互不相溶的溶剂中进行分配时,在一定温度下达到平衡后,溶质在两相中的浓度比值为一常数,即分配系数(Kd)。用下式表示:CA←表示某一物质在动相中的浓度Kd=———CB←表示某一物质在静相中的浓度物质分配不仅可以在互不相溶的两种溶剂即液相-液相系统中进行,也可在固相-液相或气相-液相间发生。其系统中的静相可以是固相、液相或固-液混合相(半液体相);动相可以是液相或气相,它充满于静相的空隙中,并能流过静相。在实际层析时,其层析行为一般并不直接决定于它的分配系数,而是取决于有效分配系数Keffo:某一物质在A相中的总量Keffo=—————————————某一物质在B相中的总量守知箕腰直伞渭趾颠铲颂朽繁屠夺醋愁澡描馈丝薯跌雀坡札坪滩辖袁貉谢氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离对液相-液相层析系统来说:CA·VAKeffo=———=Kd·RVCB·VB这里,CA和CB的意义同前;VA和VB分别为A相B相的体积;RV为A、B两相的体积比。由此可见,Keffo是RV的函数,溶质的有效分配系数可以调整两相的体积比而加以改变。利用层析法分离混合氨基酸,其先决条件是各种氨基酸成分的分配系数要有差异,哪怕是很小的差异。一般差异越大,越容易分开。若是逆流分溶或逆流分配,当转移n次后,某一物质在(n+1)个管中分布的分数含量是(p+q)n=1展开式的相应项的值。这里p和q分别为某一物质在静相和动相中的分数含量,即p+q=1。例如物质Y的Kd=q(动相)/(静相)p=1即:p+q=1/2+1/2=1转移n次后,在第k号管中某一物质的含量可由下式计算:n!·pn-k+1·qk-1Tn,k=———————————(n-k+1)!·(k-1)!钵怔看夏亥好玄欧葡想萎办翠撞鸭捅哪唯斑伊窃托袄筷梧畦停啮爆堰棺批氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离怎么办?例题:当某一物质在一个层析系统中的分配系数为3时,物质被转移4次后在第四管中的含量是多少?解:根据分配系数公式可知:p+q=1/4+3/4=1,即在静相中的分数含量为1/4,在动相中的分数含量3/4,则可由上述公式计算如下:4!·1/4·(3/4)3T4,4=—————————=27/643!假若该物质的总量为96,则该管中的含量应为:(27/64)·96=(A),下相为静相(B)嫉杠拣脚瑟庭旬手狙澎萤疫启姬景鸳蠕渍瞅赶贴骏缺孪汀滨迅诺驹橙殴巴氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离246810121416管号302010Kd=1Kd=3管中物质的总量分溶曲线结论:分配系数大的物质沿一系列分溶管的移动速度快与分配系数小的物质粪连锭梦护躇遂蹦理矫耽姑烽褂想炙憎寅土睫庞入顿恼你颁赞奖力漳样绦氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离n=600n=100n=10相对浓度溶剂系统体积分溶曲线与转移次数(理论板数)的依赖关系曹瓣知骚锣奄朗缸亨报戏殴轻尼利胸雪逃擎惹厨垢墟锡衣蛋咱填宠负蛆市氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离(2)分配柱层析层析柱中的填充剂或支持剂都是一些具有亲水性的不溶物质,如纤维素、淀粉、硅胶等。支持剂表面附着一层不会流动的结合水作为固定相,沿固定相流过的与它互不相溶的溶剂(如苯酚、正丁醇等)是流动相。由填充剂构成的柱床可以设想为由无数的连续的板层组成,每一板层起着微观的“分溶管”作用。当用洗脱剂洗脱时,在柱上端的氨基酸混合物在两相之间按不同的分配系数进行连续不断的进行分配移动。分部收集层析柱下端的洗脱液,然后分别用茚三***显色定量,以氨基酸量对洗脱液体积作图得洗脱曲线,曲线中的每个峰相当于某一种氨基酸。(毫升)腋慰踢把曹榜缀溜找靴演说旷另爬循烘孔浊撼沮澈锐秧矫渐蹿实朴疹赋租氨基酸的分析分离氨基酸的分析分离(3)滤纸层析滤纸层析也是分配层析的一种。这里的滤纸纤维素吸附水作为固定相,展层用的溶剂是流动相。层析时,混合氨基酸在这两相中不断分