线粒体DNA 氧化损伤热点的形成及其修复速率的比较.pdf

文档介绍：· 282· ChineseJournalofPharmacologyandToxicology 2001 Aug;15(4):282-286
线粒体 DNA氧化损伤热点的形成及其修复速率的比较
刘力1,庄志雄2,陈雯1,杨杏芬1,张桥1,杜柳涛1,魏青1,邓丽霞1
(,广东广州 510080;
深圳研究中心,广东深圳 518020)
摘要:本研究旨在探讨线粒体 DNA氧化损伤热点的同样,一些环境诱变剂(如黄曲霉素)的 DNA加合
形成是否与该点 3A细胞物存在分布密集区[3],某些癌症相关基因的突变亦
-1 [4,5]
暴露于 50mmol·L 过氧化氢(H2O2)30min后,,直肠癌组织
于 0,1,4及 24h收获细胞,应用连接介导聚合酶链中,发现 p53基因的 95%的突变发生在密码子 248
反应分析线粒体 DNA氧化损伤热点的修复百分率并(CGG)[4].为何存在这些 DNA氧化损伤,加合物形
与线粒体 DNA氧化损伤的总修复百分率比较,通过成,基因突变的热点,
狭缝印迹法,比较了各时间点细胞内 p53/线粒体提示 DNA加合物分布热点的 DNA修复速率较
:在 4及慢[6].是否线粒体 DNA氧化损伤热点的形成与该
24h,热点的修复速率分别为 %和 %.而线点的修复速率较慢有关?,
粒体 DNA的总修复百分率分别为 %和 %, 本研究比较了线粒体 DNA氧化损伤热点的修复百
后者与前者相比,其修复速率快 1~ DNA氧化损伤的总修复百分率,以
狭缝印迹发现各时间点细胞内 p53/线粒体 DNA比率进一步探讨该氧化损伤热点形成的可能机理.
,线粒体 DNA氧化损伤热点的形
1 材料与方法
测的线粒体 DNA的修复是可信的.
关键词:线粒体 DNA修复;氧化损伤热点;连接介 材料
导聚合酶链反应引物(见表 1)购自 DNATechnology(Denmark),
[32P]αdCTP购自 AmershamPharmacia(USA),T4连
中图分类号:R99 接酶购自 LifeTechnology(UK),甲酰嘧啶DNA糖基
文献标识码:A 酶(formamidopyrimidineDNAglycosylase,Fpg)和内切
文章编号:10003002(2001)04028205
酶Ⅲ(endonucleaseⅢ,Nth)由 Borteux教授(CEA,
France)赠送,GoldTaq购自 PerkinElmer(USA),Pre
人类近 80%肿瘤,衰老及心血管疾病,与活性 AGene试剂盒购自 BioRad(USA),大鼠肝细胞株
[1]
,自由基诱导(BRL3A)购于美国(AmericanTypeCultureCol
的线粒体 DNA氧化损伤,修复,