文档介绍：人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用①
黄红莹马远方刘广超许国强河南大学细胞与分子免疫学重点实验室,开封
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精子表面的抗原与受精和胚胎的早期发育有密,其中份精子加
切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体, 中,使精子密度达护’,置
从而影响到精子的受精功能和胚胎的发育,导致免电磁搅拌小时,用℃离心分钟,上
疫性不育。因此对人类精子膜抗原的研究有助于从清液过夜透析,用紫外分光吸收法测蛋白含量,分
蛋白质水平来揭示受精的过程和不育的机制,为不装,置一℃保存。
育特别是免疫性不育的治疗及免疫避孕开辟一条新分析按分子克隆实验指南介绍
途径。因为精子膜比较坚固,难以破碎和溶解,不易的方法采用不连续缓冲系统,分离胶,浓
得到较高浓度的精子膜抗原。而且即使精子膜被破缩胶,所提抗原加人适量还原性样品
碎溶解后,往往有许多种抗原成分混在一起,为了提缓冲液,混匀,分钟,加四孔,电泳槽内加
取一种成分,常需反复分离。目前常用的是先用物电泳缓冲液,电压,电泳小时,分离胶用
理或化学方法溶解精子膜,再用分段分离的方法纯考马斯亮蓝染色小时,脱色。根据相对分子
化各种抗原,如等所用方法。为质量标准品迁移率,利用对数关系计算出各带的相
了减少反复分离的麻烦,我室摸索了提取精子膜抗对分子质量。
原的方法并对其进行了分析,现报道如下。胶体金免疫渗滤实验用所提抗原包被硝
酸纤维素膜,制备胶体金免疫渗滤实验试剂盒,取患
材料与方法者血清测抗精子抗体。
测患者抗精子抗体采用法。
实验材料
精液正常精液及不育症患者均来自河南结果
大学医学院男科学研究所。
抗原提取液产品脱氧精子膜抗原组分相对分子质量分析缓
胆酸钠产品乙二胺四乙酸氯冲液提取的人精子膜抗原,经后,考马斯
化钠、苯甲磺酞氟产品。亮蓝染色,若抗原提取液中加,显示有个条
试剂及仪器抗精子抗体试剂盒、金带,相对分子质量分别为

标抗体及渗滤实验包装盒购自华美生物工程公司

低分子质量标准蛋白购自公
等,其中主要条带是
司硝酸纤维素膜购自公司高速冷冻离
等条
心机购自公司紫外分光光度
若抗原提取液中不加,虽然显示有条带,但经
计购自公司。
胶体金免疫渗滤法检测此膜蛋白无活性。
实验方法
膜蛋白活性检测用胶体金免疫渗滤法测定
精子膜抗原提取参考方法加以改
经法检测的不育夫妇血清抗精子抗体,结果
进。取份液化后精液,轻轻吸取非沉淀部分,做
如下法检测男性不育组阳性率为
精子记数后用离心,女性不孕组阳性率为,胶体金免
洗次,每次分钟,沉淀的精子分份分别
疫渗滤法检测男性不育组阳性率为
悬于缓冲液
,女性不孕组阳性率为,胶体金免疫
①本文为河南大学自然科学基金资助项目渗滤法与法比较,相对符合率为
作者简介黄红莹年一,女,副教授,主要从事不育症方面的,两法比较无显著性差异二
研究且特异性及敏感性均较高。抗原提取液中若不加苯
指导教师马远方,男,教授,硕士生导师,主要从事肿瘤免疫学研究。甲磺酞氟,则所提抗原无活性,用胶体金免疫渗滤法
黄红莹等人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用第期
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