文档介绍：你们好 逆转录-实时荧光定量PCR(RT-)qRT-PCR (RT-)qRT-PCR(Reversetranscription)quantitativerealtimePCRRT-PCRReversetranscription-PCRReal-timePCR样品处理细菌样品收集1-5*109细菌,置于液氮研磨,加入1mLTrizon,混匀,高温(55℃)细胞样品收集1-5*107细胞,加入1mLTrizol,混匀,进行RNA提取或者放置于-80℃冰箱动物样品取50-100mg组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可),加入1mlTrizol充分匀浆。RNA提取及反转录将处理好的样品置于室温,***仿,振荡15s,静置5min4℃离心,12000g×15min,取上清加入等体积异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10min4℃离心,12000g×10min,弃上清加入1ml75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。4℃,7500g×5min,弃上清晾干,加入适量的DEPCH2O溶解(65℃促溶10-15min)。RNA提取及逆转录注意事项样品量和Trizol的加入量一定要按比例,不能随意增加样品量或减少Trizol量,否则会使内源性RNase的抑制不完全,导致RNA降解。实验过程必须严格防止RNase的污染。DNase(RNase-free)RRI(binationRNaseInhibitor)RNA提取及逆转录RNA质量检测(完整性与纯度)RNA提取及逆转录反转录注意事项RTPrimer的选择OligodT,随机引物,基因特异性引物gDNA污染