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香蕉枯萎病原菌转 gfp 基因及其转化子生物学特性研究
李燕丹 2,1,肖荣凤 1,刘波 1*,许文耀 2
(1 福建省农业科学院农业生物资源研究所,福建福州 350003;2 福建农林大学植物保护学
院,福建福州 350002)
摘要:【目的】用原生质体法对尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum )Foc-3076
菌株进行gfp基因标记,研究转化后菌株的一些生物学特性以及在香蕉植株中的侵染特性。
【方法】用PEG介导原生质体法对尖孢镰刀菌进行遗传转化,初步研究转化后菌株的生物学
特性,并用激光共聚焦显微镜扫描香蕉盆栽苗内标记菌株的侵染特性。【结果】成功地采用
gfp基因标记了尖孢镰刀菌古巴专化型Foc-3076菌株。标记后的菌丝形态、孢子形态、厚垣孢
子与亲本菌株形状相同,且在紫外光下都呈现绿色荧光。PCR验证表明,目的基因已转入到
Foc-3076菌株。且标记后菌株较之原始菌株的抗潮霉素能力大大增加。在无选择压力条件下
继代培养6代,转化子仍然保持强烈的绿色荧光。gfp基因标记前后的菌株在培养的菌落形态、
最佳pH值、菌丝生长速度基本一致,及其致病性也基本一致,均达到90 %以上。激光共聚
焦显微镜扫描香蕉盆栽苗内标记菌株,观察到标记病原菌侵入植株体内是以孢子萌发或菌丝
体从根部侵入植株体内,主要是从根尖或是在侧根的形成点进入植株体内并就此在根皮层细
胞间生长,菌丝主要分布在寄主的细胞间隙,寄主细胞保持完整性。而后沿着纵向扩展到在
导管中向上生长至植株的假茎顶部。【结论】融合gfp基因在标记尖孢镰刀菌中的表达高效稳
定。导入的基因对宿主的生长特性和致病性没有影响,并能用于香蕉植株体内检测。
关键词:尖孢镰刀菌古巴专化型;绿色荧光蛋白基因;生物学特性;侵染;激光共聚焦
中图分类号:S432 文献标识码:A
Biochemical Characterization of Fusarium oxysporum f. sp. cubense Agent of Fusarium
Wilt of Banana ,with the Green Fluorescent Protein(GFP)Gene
Li Yan Dan2,1 , Xiao Rong Feng1, Liu Bo1,Xu Wen Yao2
( of Agrobiological Resouces, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China;2.
Institute of Plant Protect ,Fujian Agriculture and Forest University,Fuzhou 350002, China)
Abstract:【Objective】To transform Fusarium oxysporum f. sp. cubense strain with gfp gene by protoplast
methods. The biochemical characterization and the pathogenicity of the tagged strains and the wild type
srtain pared in this paper. The gfp-tagged srtain was used to mark this fungus in order to visualize
and analyze the colonization and infection processes in vivo.【Method】PEG-mediated transformation system
of Fusarium oxysporum f. sp. cubense was established. The process of the infection of the gfp-tagged strain
was observed in the banana plants using confocal laser scanning microscopy.【Result】Transformation
Fusarium oxysporum f. sp. cubense Foc-3076 strain with gfp gene was essful. Morphologically,the cells
of the transfo