文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
15-差向异构体-脂氧素A4对脂多糖诱导小胶质细胞内活性氧产
生的影响及其机制研究
姓名:翟恒
申请学位级别:硕士
专业:神经病学
指导教师:孙圣刚
2011-05
华中科技大学硕士学位论文
摘要
目的:探讨 15-差向异构体-脂氧素 A4 (15 - epimer - lipoxin A4 ,
15-epi-LXA4)对脂多糖(haride, LPS)诱导的小鼠小胶质细胞株
BV-2 细胞活性氧簇(Reactive oxygen species, ROS)产生的影响及其机制。
方法:以 100ng/ml LPS刺激体外培养的 BV-2 细胞成为炎症模型,15-epi-LXA4
预处理 BV-2 细胞 30min 后再用 LPS 刺激 BV-2 细胞,酶标仪检测 BV-2 细胞 ROS
的荧光值;提取细胞浆和细胞膜的蛋白,免疫印迹法检测细胞浆和细胞膜上
phox phox
p47 蛋白的表达量,以及共聚焦免疫荧光法直接观察 BV-2 细胞内 p47 蛋
白膜移位的情况。
结果:100ng/ml LPS 可以刺激 BV-2 细胞 ROS 的产生,激活 NADPH 氧化酶的
phox
活性,使 p47 由细胞浆转移到细胞膜。而 15-epi-LXA4 可以降低 LPS 诱导的
phox
ROS 的生成;与 LPS 处理组相比较,p47 的细胞膜上的蛋白表达量减少,胞浆
phox phox
内的 p47 蛋白表达量增多。共聚焦免疫荧光可直接观察到 LPS 处理后 p47
phox
在细胞膜上的荧光值较对照组高,而 15-epi-LXA4 预处理组细胞膜上的 p47
相比 LPS 处理组荧光值减低。
结论:15-epi-LXA4 可以抑制 LPS 诱导的 BV-2 细胞内 ROS 的生成,抑制 NADPH
phox
氧化酶亚基 p47 的膜移位,抑制其激活,从而对小胶质细胞发挥抗炎症和促
炎症消退的保护作用。
关键字:15-差向异构体-脂氧素 A4(15-epi-LXA4),神经炎症,帕金森病,
活性氧簇(ROS),NADPH 氧化酶。
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华中科技大学硕士学位论文
Abstract
Aim: To investigate the effect and mechanism of 15 - epimer - lipoxin
A4 reduces reactive oxygen species generation in BV-2 microglia induced
by haride.
Methods: Interfere with 15-epimer-lipoxin A4 to BV-2 cells in 30
minutes, and then BV-2 cells were stimulated with 100ng/ml LPS to induce
inflammatory response. Use microplate reader to detection the fluorescene
phox
of ROS after stimulation with LPS at different times. p47 protein
express in cytoplasm and cell membrane were detected by western blot, and
phox
directly observed membrane translocation of p47 protein by confocal
immunofluorescene.
Results: Compared with LPS group, 15-epimer-lipoxin A4 significantly
reduced the generation of LPS-induced Reactive oxygen species (ROS),
phox
and inhibited the membrane translocation of p47 protein.
Conclusion: In this study we can find that 15-epimer-lipoxin A4
inhibits LPS-induced pro-inflammatory mediators, so it can block or
relieve t