文档介绍：设计性实验报告2012-2013学年第一学期课程名称:生物化学题目:牛血清清蛋白的鉴定院系:基础医学院班级:2011级k-3班姓名:余国清学号:1120150305日期:2012-12-02实验目的:通过牛血清清蛋白的提取与鉴定,掌握盐析、离心、透析、电泳、及呈色反应的原理及应用。实验原理:应用相同浓度硫酸铵反复盐析法,将血清中的清蛋白与其他球蛋白分离,再利用透析法除盐,即可提取清蛋白。再利用电泳技术,即可对牛血清清蛋白进行分离与鉴定。实验步骤:、加入等量PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)稀释血清,摇匀后,,边加边摇,然后再2000r/min离心10min,将上清液倒入试管中,留供后面实验用。(15cm*15cm)一张,折成袋形,将前面第一次盐析得到的含清蛋白的上清液倒入袋内,用线绳扎紧上口(注意要留有空隙),使透析袋下半部浸入盛有半杯蒸馏水中,对蛋白液进行透析,并用玻璃棒搅拌袋外液体,以缩短透析时间。还应经常换水,并用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+,观察颜色变化,直至袋内NH4+透析完毕。将袋内液体倒入试管,既得牛血清清蛋白溶液。①.*8cm膜条,将无光泽面向下,放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透,取出,用干净滤纸吸去多余的缓冲液,,将牛血清样品与待测的牛血清清蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。②.电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上,放置时无光泽面(即点样面)向下,点样端置于阴极,待平衡5min后,即可通电。用160伏电压通电60分钟,通电完毕后,用镊子将膜条取出。③.染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染液中,染2min取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min,直至背景漂净为止,用滤纸吸干薄膜。,比较位置是否一致。预期结果:如果醋纤膜上的色带位置一致,则说明提取的清蛋白得到了纯化;若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的色带区域,则说明清蛋白的提取不够纯。实验仪器:名称规格、*8cm1电泳玻璃纸15cm*15cm1透析清蛋白烧杯1透析试管2装清蛋白滴管2加试剂玻璃棒1搅拌比色瓷盘2检验NH4+天平1平衡离心管实验试剂:名称规格、型号数量说明牛血清标准液2ml牛血清待测液2mlPBS稀释血清纳氏试剂检验NH4+氨基黑10B染色液染色巴比妥缓冲液浸透薄膜漂洗液Ⅰ漂洗漂洗液Ⅱ漂洗漂洗液Ⅲ:PBS试剂:()%NaCl溶液。:。漂洗液:95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,蒸馏水50ml。氨基黑10B染色液:,甲醇50ml,冰醋酸10ml,蒸馏水40ml。巴比妥缓冲液:,,用少量蒸馏水加热溶解后,再加水稀释至1000ml。纳氏试剂:溶解碘化钾30g于蒸馏水20ml内,。于此碘液内加入纯***30g,用