文档介绍：—疞■·瞄墨,口甀簂鞘氨醇激酶参与胶质瘤细胞生长的调控及其分子机制研究月日广州课题来源:国家自然科学基金资助学位申请人教劳动卫生与环境卫生学答辩委员会主席林忠宁教授答辩委员会成员余日安教授论文评阅人黄汉林教授刘移民教授专业称指导师蒋义国教授丁振华教授毛丽梅教授唐小江教授南方医科大学级博士学位论文名‘簁痥麓妒阍掳镞竿蟆玭多‘蛰誉并重爹洼瑶酽一》
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鞘氨醇激酶参与胶质瘤细胞生长的调控及其分子机制研究博士研究生:张贺指导教师:邹飞教授摘要者的生物学功能不尽相刚恰R酝难芯糠⑾痔乇鹌渲械腟在多种恶性肿研究背景鞘氨醇激酶,易寰哂辛礁龀稍鼻拾贝技っ竘与鞘氨醇激酶淙涣秸叨际茿依赖的蛋白激酶,但两瘤中存在着高表达【,并且其高表达与肿瘤患者的预后密切相关‘在恶性多形性神经胶质细胞瘤,中也存在高表达,并且与相对与细胞中低表达慕褐柿龌颊呦啾龋赴蠸高表达的胶质瘤患者平均生存时间明显减少,显示越褐柿鱿赴纳ひ约捌浠者预后密切相关。相较于鳶在肿瘤中的作用目前并不十分明确,但其可以在细胞核内发挥作用,调控组蛋白的乙酰化,进而影响到多种基因的表达【,鞘氨醇激酶催化使鞘氨醇蛊淞姿峄汕拾贝家籰姿—琒湮R恢种史肿樱梢跃哂械骺叵赴纳妫凋亡【话诟评胱拥钠胶鈌灰约把9艿纳傻榷嘀稚痰墓δ堋并且在肿瘤的发生、发展及耐药性的产生中发挥重要作用【,D壳叭衔J切使鞘氨醇激酶的生理功能的重要信号分子。梢酝ü街址绞椒⒒幼饔茫博士学位论文
以州⑻逋馊毖醯哪P停ü【】;另一种方式为直接在胞内发挥其信号分子作用【H死嘞赴南赴ど洗嬖谖种亚型氖芴宓难切.,。氖芴逦狦偷腉蛋白偶联的受体,与其相应的配体结合后可以激活磷脂酶,进而活化下游的信号通路,发挥其生物学效应【。以往研究发现由于肿瘤组织生长迅速,而血管生成较慢,血供不足,因此在实体肿瘤组织中存在着明显的缺氧现象口。在胶质瘤的研究中发现胶质瘤细胞不仅可以对缺氧微环境耐受,缺氧还可以降低胶质瘤细胞对放疗及化疗药物的敏感【】。而年等人的研究发现谌毖豕讨斜泶锷系鳎活性增强,但此现象对胶质瘤生长的作用并不清楚。本研究以缺氧条件下的胶质瘤细胞为研究对象,对鞘氨醇激酶是否参与胶质瘤的生长调控以及其分子机制进行探讨,以期了解胶质瘤在缺氧微环境中的生长以及细胞信号的调节机制,为可能胶质瘤的分子治疗提供理论基础。目的本研究通过D馊毖酰诖四P突∩咸教智拾贝技っ冈诮褐柿鱿赴生长中的作用及其机制,研究缺氧微环境下胶质瘤细胞信号调节通路,以期为恶性胶质瘤的治疗研究提供新思路。方法条件下鞘氨醇激酶抑制剂陨窬褐氏赴鱿赴礥蚒细胞生长的影响。ü庖哂ü饧际酰褂眉す夤簿劢瓜晕⒕倒鄄霺与赴诒泶锴榭觯詗检测缺氧对蚐表达的影ü齊碌鱏与泶铩7直鹩胵检测隨和蛋白水平的变化,以检测在缺氧条件下隨下调对赴さ挠跋臁摘要响。和
氤Q踝橄啾龋%或軨缺氧处理对细胞增殖无明显影ü齊碌鱏和谋泶锖螅粤魇较赴跫觳馇拾贝激酶在缺氧条件下对赴芷诘挠跋臁检测缺氧条件下姿峄降谋浠以种艵的活化,以检测缺氧条件下訳细胞生长的影响,以流式细胞术检测缺氧条件下其对赴芷诘挠跋臁以鞘氨醇激酶抑制剂し种魄拾贝技っ傅幕钚裕騍猯干扰谋泶铩干扰谋泶锖螅赴氧处理訵检测姿峄谋浠怨鄄烨拾贝技っ付匀毖条件下罨挠跋臁以种艷偷腉蛋白的活性,以抑制磷脂酶幕钚裕以检测缺氧条件下两者对赴さ挠跋欤粤魇较赴跫觳缺氧条件下两者对赴芷诘挠跋欤詗检测两者对缺氧条件下赴鸈磷酸化的影响。结果响。鞘氨醇激酶抑制剂灾种粕窬褐柿鱿赴礥蚒的增殖。,与对照组相比相对细胞数分别在陆盗%、%,均有显著统计学差异‘,,.,甋与赨细胞内广泛表达;缺氧诱导泶镌加,在毖醮韑蠼衔创碜楸泶锟J荚龈.,后达到峰值..,均有显著统计学差异琻6鳶的表达在缺氧处理蟪中陆担笙陆档蕉哉兆榈ィ哂邢灾臣蒲Р博士学位论文甒。
礁鯯特异性的:%琻鞍姿降谋泶锛跎俚揭跣远哉兆榈%.,。干扰组细胞泶锩飨韵碌鳎胱H疽跣远哉盏南赴啾龋转染的赴っ飨允芤种.%尸.,%.,;鞍姿降募跎俚蕉哉兆榈ズ%,干扰组细胞泶锩飨韵碌琻S胱H疽跣远哉盏南赴啾龋H維片段的赴っ飨允芤执鴌.%琻阴性对照组相比,转染匾煨愿扇牌蜸的赴鱿置飨缘闹芷谧柚停柚陀贕疢期%...,;而转染匾煨愿扇牌蜸腢细胞亦出现明显的周期阻滞,阻滞于.%琻姿峄腅在毖醮罂J荚龈撸后达到峰值,而后有逐步下降。谌毖跆跫拢珽抑制剂灾种芔细胞的生长,%,均有显著统计学差异俨.,;并且使赴柚陀