文档介绍：ABO血型鉴定不规则抗体筛选
玻片法(正定型)
试管法(正定型,反定型)
盐水法
聚凝***法
抗人球法
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ABO血型鉴定实验原理
抗原抗体反应——在ABO血型系统中,红细胞膜上抗原分A和B两种抗原,而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体,则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型
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IgM抗体凝集红细胞示意图
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IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
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试剂
抗A、抗B试剂血清
5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液
受检者血清
5%的受检者红细胞悬液(从指尖或耳垂取血一滴,加入含1ml生理盐水的小试管内,混匀,即得约5%红细胞悬液。采血时应注意先用75%酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞(~ ml)用生理盐水洗涤3次,然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)
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1. 玻片法
(1) 取双凹玻片一块,用干净纱布轻拭使之洁净,在玻片两端用记号笔标明A及B,并分别各滴入A及B标准血清一滴。
(2) 用滴管吸取红细胞悬液,分别各滴一滴于玻片两端的血清上,注意勿使滴管与血清相接触。
(3) 竹签两头分别混合,搅匀。用两根分别用来混合A型和B型标准
血清和红细胞悬液
(4)观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象,肉眼不易分辨时,则在低倍显微镜下观察,如有凝集反应,可见红细胞聚集成团。
(5) 判断血型根据被试者红细胞是否被A,B型标准血清所凝集,判断其血型。
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(正定型)
A B
A标准血清 2滴
B标准血清 2滴
受试者的红细胞悬液 1滴 1滴
混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。。
取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块,管底细胞边缘呈花边状,轻弹试管凝块不散;完全不凝的试管,血细胞均匀的沉到管底,边缘整齐,用手轻弹试管,红细胞像一缕烟似的立即上升,随即成为均匀的悬液;轻微凝集的,必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。
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试管法(反定型)
Ac Bc Oc
受检者血清 2滴 2滴 2滴
5%的A型红细胞悬液 1滴
5%的B型红细胞悬液 1滴
5%的O型红细胞悬液 1滴
立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。
轻轻扣动试管底部,观察结果----同前
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血型判定swf
正定型
反定型
结果
抗A 抗B
A型RBC B型RBC O型RBC
- -
+ + -
O
+ -
- + -
A
- +
+ - -
B
+ +
- - -
AB
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五注意事项
玻片、试管都要标记!!!, A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的****惯!
所用玻片、试管实验前必须清洗干净,以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面,竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。
一般先加血清,然后再加红细胞悬液,便于核实是否漏加血清。
离心时间、速度严格要求,以防假阳性或假阴性结果。
试验用血清和试剂红细胞都应标准化。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度,有助于A、B亚型的发现,观察后立即记录观察结果。
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