文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
苯二甲酸酯类物质环境暴露对男性生殖损害的研究*
姓名:韩雪
申请学位级别:博士
专业:卫生毒理学
指导教师:曹佳
2011-05
第三军医大学博士学位论文
重庆及三峡库区多环芳烃和邻苯二甲酸酯类物质环境暴
露对男性生殖损害的研究*
摘要
研究背景
人口和环境问题是全球面临的重大问题。人类健康及生殖发育问题是影响人类社
会发展的重要问题。在过去的几十年中,人类精液质量出现了明显的下降,有关精液
下降的地域差异问题也引起了人们的注意。环境因素特别是特殊的地理环境因素对精
液的影响越来越得到重视。重庆地处中国西南,位于三峡库区上游,是中国重要的中
心城市之一,三峡工程竣工后其对生态环境和库区居民健康的影响受到全国乃至全世
界的关注。本室的前期研究发现,三峡库区水中持久性有机污染物污染的主要特点是
以多环芳烃类(PAHs)和邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物为代表的复合性污染。PAEs 和
PAHs 类物质大多具有明确雄性生殖毒性,但目前尚缺乏这两类物质对人群特别是普
通人群生殖损害研究的相关资料。
目的
对三峡库区中青年男性的精液质量进行现况研究,全面、深入地了解三峡库区中
青年男性精液质量的现状,为重庆三峡库区男性精液质量的研究提供基础数据。探寻
PAHs 和 PAEs 环境暴露水平对男性生殖健康的影响,为 PAHs 和 PAEs 环境污染的
防治和人群健康的保护奠定基础,为男性生殖损害的预防提供理论依据。
材料与方法
1. 重庆及三峡库区育龄男性精液质量的流行病学调查
在三峡库区重庆段的上、中、下游,选取具有代表性的南岸区,沙坪坝区、万州
区、忠县、云阳县以巫山县及作为研究现场,招募 20 到 40 岁,没有泌尿生殖系统疾
病及其他慢性疾病的汉族男性作为研究对象,建立流动实验室,采集受试人群的精液
样本,运用计算机辅助精子分析(CASA)技术,对收集的精液进行分析,并按照 WHO
z 国家自然科学基金重点项目资助(No. 30630056)
z 重庆市科技攻关项目().
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的标准对精液质量进行评估。以问卷调查的形式收集受试人群的人口学资料、生活习
惯、生育状况、疾病史、职业暴露史等信息,并通过健康体检对受试者的生殖系统健
康状况进行评估。运用 统计软件对数据进行独立样本 Kruskal-wallis 秩和检
验和回归分析。
2. 重庆及三峡库区多环芳烃环境暴露水平与男性生殖损伤的关联性研究
通过固相萃取,高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FD)技术,分析 232 例研究对象尿
液中 2-羟基萘,2-羟基芴,9-羟基菲及 1-羟基芘浓度,并用肌酐进行校正。受试者的
精液参数按照 WHO 参考值分为正常和异常组,精液参数分别作为连续变量和分类变
量进行分析。运用 Annexin V/PI 染色-流式细胞分析技术,单细胞凝胶电泳实验分析评
价精子凋亡及 DNA 的损伤情况。利用放射免疫分析法,分析受试者血清中睾酮,卵
泡刺激素,黄体生成素及雌二醇的浓度,利用酶联免疫技术对受试者血清中雄激素结
合蛋白水平进行检测,并计算血清中游离睾酮的含量。运用 Spearman 秩相关,多元线
性回归和 logisitic 回归分析等分析方法分析各代谢产物与男性生殖损伤各项指标间的
关联。
3. 重庆及三峡库区邻苯二甲酸酯环境暴露水平与男性生殖损伤的关联性研究
通过固相萃取,液相色谱串联质谱(HPLC-MS)技术,分析 232 例研究对象尿液中
邻苯二甲酸单丁酯、邻苯二甲酸单苄酯、邻苯二甲酸单乙酯、邻苯二甲酸单乙基己基
酯和邻苯二甲酸浓度。PAEs 代谢产物浓度既作为连续变量也按三分位数分层进行分
析。受试者的精液参数按照 WHO 参考值分为正常和异常组,精液参数分别作为连续
变量和分类变量进行分析。运用非条件 logistic 回归模型来分析分层后的 PAEs 代谢产
物浓度和精液常规间的关联,同时使用偏相关分析研究连续性尿液 PAEs 代谢产物水
平和精液参数,精子凋亡参数,单细胞凝胶电泳指标,及各种血清性激素水平之间的
关联。
结果
1. 重庆及三峡库区育龄男性精液质量的流行病学调查
重庆三峡库区育龄男性精液常规各项参数的中位数值为:pH 值,;精液量,
;精子密度,×106 /mL;单次射精精子数,×106;快速前向运动精子
率(a 级精子%),33%;前向运动精子率[(a+b)级精子%],5