文档介绍：王升友(江苏省赣榆县城头中学,222131)中学生物教学,2003年第6期在教学过程中,发现许多学生对于用斐林试剂鉴定可溶性还原糖与用双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验中存在着许多疑难问题,为便于学生理解和掌握,现归纳总结如下:1可溶性还原糖鉴定及蛋白质的鉴定原理不同11可溶性还原糖鉴定原理可溶性还原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖等的分子内都含有游离的具有还原性半缩醛羟基,当与新配制的一定浓度的Cu(OH)2悬浊液混合后,在加热的条件下,将Cu(OH)2还原为砖红色的Cu2O沉淀,而还原性糖本身则被氧化为相应的有机酸。以葡萄糖为例的反应式如下:12蛋白质的鉴定原理在碱性溶液中,双缩脲能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物。故双缩脲试剂可鉴定双缩脲的存在,而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键。因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。2斐林试剂与双缩脲试剂的配制与使用不同21斐林试剂的配制甲液:质量浓度为01g·mL-1的NaOH溶液乙液:质量浓度为005g·mL-1的CuSO4溶液使用时临时配制,将4滴~5滴乙液滴入2mL甲液中,振荡混合均匀后即可使用。22双缩脲试剂的配制取10gNaOH放入量筒内加水至100mL,·mL-1的NaOH溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。取1gCuSO4放入量筒中,加水至100mL,·mL-1的CuSO4溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。使用时,先向试管中加入2mL试剂A,摇荡均匀,再向试管中加入3滴~4滴试剂B,摇荡均匀即可。3反应过程中,出现的颜色变化及原因不同31用斐林试剂鉴定还原糖的实验因先加入刚配制的Cu(OH)2,故溶液变成浅蓝色;加热后,部分Cu(OH)2被还原为砖红色的Cu2O,因二者混合故呈现棕色;随着反应的继续进行,Cu(OH)2被全部还原为Cu2O,故而出现砖红色的沉淀。颜色变化为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。32用双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验加入双缩脲试剂A,溶液为无色;加入双缩脲试剂B,因有Cu(OH)2生成,故呈现浅蓝色;振荡均匀后,由于反应的进行,出现紫色的络合物。颜色变化为:无色→浅蓝色→紫色。4实验过程中,应熟练掌握的问题41斐林试剂为何要现配现用?因斐林试剂很不稳定,容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀,所以应将甲液、乙液分别配制储存,使用时再临时配制。,为何不能先加入NaOH,后加入CuSO4,而必须混合后再加入?因为若先加入NaOH,还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性,再加入CuSO4后不能产生Cu2O沉淀,只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液,才可产生砖红色沉淀。43在做该实验时,为何一般不选用双子叶植物的叶子和单子植物(如韭菜、鸢尾)的叶片?在双子叶植物中,光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉,暂时储存在叶子内,因此最好不用双子叶植物的叶片作实验材料;在单子叶植物如韭菜、鸢尾,并不将光合作用的初始产物转变为淀粉,因此叶内含有大量的可溶性还原糖,但是,由于叶片中叶绿素的颜色较深,对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用,导致实验现象不明显,因此也不选用单子叶植物的叶子。5应注意的问题51在使用双缩脲试剂时,为什么要先加入试剂A,后加入试剂B?先