文档介绍：142-150 草业学报第20卷第5期
2011年10月 ACTAPRATACULTURAESINICA ,
三角紫叶酢浆草犐犛犛犚反应体系的建立与优化
胡盨1,3,王永清2,陶炼2
(,四川雅安 625014;,四川雅安 625014;
,四川成都 610066)
摘要:采用正交设计直观分析法,对影响三角紫叶酢浆草ISSR-PCR 反应较大的5个因素(Mg2+ 、Taq酶、引物、模
板 DNA、dNTP)在5个水平上进行优化实验;从100个随机引物中筛选出适宜的引物,并筛选出其最佳退火温度;
最后对反应程序进行优化。由此首次建立了适合三角紫叶酢浆草的ISSR-PCR 反应体系:25μL 反应液中含 10
2+
×,Mg ,,,模板 DNA60~100ng,。
反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性50s,退火时间60s(根据不同引物选择对应最佳退火温度),72℃
min,循环40次;72℃延伸7min,4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR 标记技术研究酢浆草属植物提
供理论依据和技术参考。
关键词:三角紫叶酢浆草;ISSR;反应体系
中图分类号:Q94633; 文献标识码:A 文章编号:10045759(2011)05014209
三角紫叶酢浆草(犗狓犪犾犻狊狋狉犻犪狀犵狌犾犪狉犻狊)是酢浆草科(Oxalidaceae)酢浆草属(犗狓犪犾犻狊)多年生草本植物。其叶
片常年为紫红色,叶型奇特,形似飞舞的紫蝴蝶,花期长达数月,花朵白色点缀于紫叶之上别致醒目,是一种极具
观赏价值的彩叶植物。酢浆草属是一个世界性大属,主要分布于非洲和南美洲。国外对酢浆草属植物的研究报
道主要集中于其生物学特性研究、植物分类和系统进化[1]、次生代谢产物提取及结构功能分析[2,3]等领域。分子
标记技术应用于酢浆草属植物的报道主要针对安第斯山脉的块茎作物酢浆薯(犗狓犪犾犻狊狋狌犫犲狉狅狊犪)及其相近种开
展,涉及亲缘关系分析和系统分类[4,5]、遗传多样性分析[69]、遗传退化[10]和种质资源保护分析[7,9,11]等方面。我
国也有较丰富的酢浆草属植物资源(包括本土种和外来种),在中国大陆由南到北及海南、香港和台湾地区都有广
泛的分布[12]。相关研究主要局限于个别种类的快繁体系建立[13,14]和园林应用、植物分类和系统进化研究[1517]、
抗性生理研究[18,19]、生物入侵和土壤生态学研究[20,21]。国内利用分子标记对酢浆草属植物进行分类、种质资源
鉴定和遗传多样性的研究相对较少。
ISSR (intersimplesequencerepeats,简单重复序列区间)是由 Ziekiewicz等[22]在 SSR (simplesequence
repeats)标记的基础上创建的分子标记技术。ISSR 标记不依赖基因组序列信息,适用的物种广泛,多态性较
RAPD (randomam