文档介绍：:..实验一牛肉膏蛋白豚培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、。,掌握配制培养基的一般方法和步骤。。。二、基本原理牛肉膏蛋白腺培养基是一种应川最广泛和最普通的细菌棊础培养基,有时乂称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白腺和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白腺丄要提供氮源,而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定暈琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96°C时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40°C时凝固,通常不被微牛物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质最和气温的不同而有所不同。山于这种培养基多用于培养细菌,I大1此,要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌的牛长繁殖。牛肉膏蛋白月东培养基的配方如下:牛肉膏3g蛋白月东10gNaC15g 琼脂15—20***—、器材牛肉膏,蛋口腺,NaCl,琼脂;Imol/LNaOH,lmol/LHC1;试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸(—),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。四、、蛋白豚、NaCl放入烧杯屮。4:肉膏常川玻棒挑取,放在小烧杯或衣面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后ft接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白豚很容易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙川于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。,川玻棒搅匀,然厉,在冇棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入己溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。,先川精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,川滴管向培养基中逐滴加入lmol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,。反乙则用lmol/LHC1进行调节。注意PH值不要调过头,以避免冋调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些耍求pH值鮫精确的微牛物,其pH的调节可用酸度计(使用方法,可参考有关说明书)。,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一部可以省去(本实验无需过滤)。,可将配制的培养基分装入试管内或三和烧瓶内。分装装置见图2—1。分装过程中注意不耍使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。(1) 液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。2-1培养里分装装置(2) 液体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图2-3o分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一般为宜。(3)固体分装试管--般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。,在试管口或三和烧杯瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养皐内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、H期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、H期。(15磅/英寸2),,20分钟高床蒸汽灭菌。如]大I特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂心。-3斜面摆放法将灭菌的试管培养基冷至5CTC左右,将试管棉塞搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的-半为宜。:棉塞的制作棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染;二是保证通气良好。因此,棉塞质量的优劣对实验的结杲有很人的影响。正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口(或三角烧瓶口)完全适介,过紧则防碍空气流通,操作不便;过松则达不到滤菌的日的。加塞时,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2-2郴瘫小做注将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24一18小时,以检查灭菌是否切底。2/3在试管口内°棉塞的制作过程如图2-2o附:高压蒸汽灭菌一、基本原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅