1,25二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶9表达的影响.doc

文档介绍：1,25二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶9表达的影响
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【摘要】目的: 观察1,25二羟维生素D3(VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响,探讨VD在哮喘治疗中的作用。方法: BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组。卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型; HE染色观察各组气道结构改变情况; 采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况; 采用RTPCR法检测各组的MMP9mRNA表达水平。结果: ①HE染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变, 而VD组可部分逆转上述病理改变; ②VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组, 但仍高于对照组(); ③VD组肺组织MMP9mRNA表达水平均明显低于哮喘组, 但仍高于对照组() 。结论: VD干预可明显减轻慢性哮喘气道重塑的病理改变; 并可通过部分抑制肺内MMP9的表达来延缓气道重塑进程。
【关键词】哮喘气道重塑 1,25二羟维生素D3 基质金属蛋白酶9
近年来气道重建在哮喘发病机制和治疗中的作用受到越来越广泛的关注, 它被认为是哮喘发病机制的一个重要环节和哮喘气道病理改变的重要基础, 同时也是哮喘治疗的一大靶向目标。1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]是维生素D的活性代谢产物, 它不仅是体内骨代谢及钙
稳态的关键性调控因子, 同时还是一种第二类固醇激素, 能调节更为广泛的生理作用[1]。但目前国内外尚无其调节哮喘气道重塑的相关研究报道。本试验旨在利用卵白蛋白(ovalbumin, OVA)激发的慢性哮喘小鼠模型, 探讨1,25二羟维生素D3对哮喘气道重构的干预作用, 为其
在哮喘的临床应用提供新的理论依据。
1 材料和方法
材料
OVA和1,25二羟维生素D3为美国Sigma 公司产品; 氢氧化铝凝胶由上海生物制品研究所提供, TRIzol试剂为美国Invitrogen公司产品; Taq 酶及逆转录RT试剂盒为美国Promega公司产品。
方法
实验动物分组及哮喘模型的制备
4~6周龄健康BALB/c小鼠30只(清洁级, 雄性, 体质量18~22 g), 由第四军医大学动物实验中心提供。随机将小鼠分为3组: 哮喘组、 VD组及对照组, 每组10 只。哮喘组分别于第0、 7、 mL致敏液(含OVA 10 μg十氢氧化铝凝胶2 mg)进行致敏;从第21天开始为激发阶段, 将小鼠置于自制密闭箱内, 给予雾化吸入25 g/L的OVA溶液30 min, 其中第21天~第27天每日雾化1次, 而后第28天~第77天隔天雾化1次, 共激发8周; VD组以上述同样的方法用OVA进行致敏和激发小鼠, 并在每次激发前1 h分别予以腹腔注射100 ng的 1,25二羟维生素D3; 而对照组则用等量生理盐水代替OVA进行腹腔注射和雾化吸入。末次激发后24 h内处死动物, 取右肺组织用锡铂纸包裹,即刻-70℃冻存,用于总RNA及总蛋白抽提, 左肺经40