文档介绍：实验免疫比浊法检
测免疫球蛋白
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材料和方法
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实验结果
实验原理
实验原理
免疫球蛋白(Ig)是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白,能与诱导其产生的抗原发生特异性结合,是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染,如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高:在系统性红斑狼疮患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见;在类风湿关节炎中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况。
实验原理
血浆蛋白分析技术经历了:
试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术,其中很重要得一类就是免疫比浊法。
实验原理
抗体(Ab)与可溶性抗原(Ag)反应,形成一定结构的免疫
复合物,在PEG作用下,成为悬浮于反应溶液中的微粒,使样品浊
度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质,
当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时,由于被不溶性
免疫复合物吸收而减弱,故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈
正相关。当抗体浓度固定时,样品的浊度与其中所含抗原量成正比。
实验原理
聚乙二醇即PEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物,聚乙二醇具有高度的亲水性,在水溶液中有较大的水动力学体积,并且没有免疫原性。
在免疫反应中,为增强抗原抗体反应常使用增聚剂,如3-4%的聚乙二醇等,利用其破坏抗原抗体的水化层,促进其靠近反应,但如浓度不适合,高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。
优点
稳定性好,敏感性高(达ng/L)、精确度高,干扰因素少,结果判断更加客观、准确。
快速、简便,结果回报时间短,便于及时将各种信息向临床反馈,又可节约大量人力物力,利于大批量样品的处理。
能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
可利用多道计数器、测光仪,同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目,血清用量少,具有明显的应用优势。
免疫比浊法的特点:
实验原理
缺点
当抗体或抗原大量过剩时,出现可溶性的复合物,造成误差。
应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩,此值要预先测定。
受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度,造成假性升高。
少量小抗原抗体复合物极难形成浊度,除非放置较长时间。
如要形成较大的的复合物,抗原抗体量应较大。
实验原理
免疫比浊法的特点:
实验材料
,M,G(IgA, IgM, IgG)测定试剂
,M,G (IgA, IgM, IgG)校准品,蒸馏水, 血清样本
、试管
、水浴箱
实验方法
空白管
校准管
样本管
+蒸馏水
(10mL)
+校准品
(10mL)
+样品血清
(10mL)
OD340
+IgX试剂
(1mL)
37℃
5min
37℃,10min
混匀