AdHGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应.doc

文档介绍：AdHGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:哈小琴,吕同德,赵治华,唐瑜,昌业伟
【摘要】目的: 观察AdHGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)的转染表达及增殖效应. 方法: 以不同转染强度(50,100,200 MOI)AdGFP转染原代培养大鼠ATⅡ细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测转染效率. 并以最佳感染强度AdHGF转染ATⅡ细胞,ELISA方法检测转染后48, 72 h上清中HGF的表达水平. 用MTT法检测表达产物对肺泡上皮细胞的效应. 结果: 感染强度为100 MOI时,对ATⅡ%,以100 MOI的AdHGF转染6×105细胞后48, 72 h上清中HGF的表达分别为(±) ng和(±)ng,且表达产物对ATⅡ细胞有明显的促增殖作用. 结论: AdHGF可有效转染ATⅡ细胞并在细胞中表达,表达产物对该细胞有明显的促增殖作用.
【关键词】 AdHGF;肺泡Ⅱ型上皮细胞;转染;基因表达;细胞增殖
0引言
肺泡上皮细胞是覆盖于肺泡表面的一层上皮细胞,分为
Ⅰ型和Ⅱ型. 其中肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ cell, ATⅡ细胞)具有重要的功能,当受到各种刺激时, ATⅡ细胞可增生并修复已损伤的上皮细胞,起着肺泡上皮干细胞的作用[1]. 肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是一多功能生长因子,在生理状态下可促进肺上皮细胞的发生、管腔形成及肺支气管上皮细胞的增生,HGF也可促进急性肺损伤的肺上皮组织增生和修复[2]. 我们在前期构建的携带人HGF基因的重组腺病毒(AdHGF)[3]基础上,观察AdHGF对ATⅡ细胞的转染表达及增殖效应,为AdHGF治疗肺损伤提供依据.
1材料和方法
HGF, 携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(AdGFP)由军事医学科学院二所三室提供,本课题组构建[3];抗人HGF mAb(RD),重组人HGF蛋白纯品(RD),DMEM(Gibco),胎牛血清(Gibco),碱性磷酸酶显色试剂(北京中山生物技术有限公司),MTT(BBI);Wistar大鼠(甘肃省中医学院,清洁级,180~230 g).

Ⅱ细胞原代培养Wistar大鼠腹腔注射肝素(4 U/g)和异戊巴比妥钠(100 mg/100 g),无菌分离出气管及肺置于生理盐水中,用生理盐水冲洗肺动脉两次后行肺支气管插管,用8~15 mL溶液A( mmol/L NaCl, mmol/L KCl, mmol/L Hepes, mmol/L Na2HPO4, 10 mmol/L D
Glucose, pH )冲洗2~3次后, g/L胰酶冲洗1次,再将胰酶灌满肺(约8~15 mL),37℃消化20~30 min;剪碎肺组织置入含250 mL/L胎牛血清的溶液B( mmol/L CaCl2, mmol/L MgSO4)中, 37℃振摇4 min后过100目和200目细胞筛,并用Pe