文档介绍：CCK8对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤保护相关蛋白质的实验分析
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:刘晓燕李洪李娟王丽段承刚陶忠桦何涛
【摘要】目的 K8)对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤的保护作用。方法 K8对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠模型的刺激前后血糖和血清胰岛素的水平,采用双向电泳并结合生物信息学方法,观察刺激前后胰腺组织蛋白质表达的差异。结果 K8刺激引起胰岛细胞JIP1、RBBP7、PP2AB、PDX1、BCLX 5种蛋白质的表达明显增强,这些蛋白在促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、刺激胰岛素基因表达等方面发挥重要作用。K8可能通过刺激特异蛋白质的表达,对糖尿病大鼠受损胰岛细胞起到一定的保护和恢复作用。
【关键词】 CCK8;糖尿病模型;胰岛细胞;蛋白质表达;大鼠
K)是广泛分布于胃肠道及中枢和周围神经系统一种典型的脑肠肽,KK完全功能的最小活性片段,在种属间具有相对保守性。K有明显的刺激胰岛素分泌的作用,也是调节胰腺细胞再生的主要胃肠激素〔1,2〕。K
K及其类似物是极具潜力的2型糖尿病的治疗药物〔3~5〕。K对于糖尿病胰岛细胞损伤是否具有保护作用及其机制还知之甚少。本研究在建立糖尿病大鼠模型的基础上,K8是否通过刺激特异性蛋白质的表达,K8胰腺保护作用的认识,K及其类似物在2型糖尿病治疗中的应用提供实验依据。
1 材料与方法
动物及主要试剂
SD大鼠(重庆腾鑫生物技术有限公司);CCK8和链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司;丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、超纯尿素、二硫苏糖醇、CHAPS、甘氨酸、甲基乙二胺(TEMED)、磷酸三丁酯(TBP)、过硫酸铵(APS)、十二烷基磺酸钠(SDS)、固相pH梯度干胶条(pH 3~10,17 cm)和矿物油均购自BioRad公司;枸橼酸钠购自中国上海试剂一厂;蛋白分子量Marker和苯甲基磺酰氟(PMSF)购自碧云天生物技术研究所;125I胰岛素放射免疫试剂盒购自北京普尔伟业生物科技有限公司。
实验方法
分组及糖尿病模型的建造
SD大鼠68只,随机分为正常对照组和糖尿病模型组。糖尿病模型组大鼠禁食10 h,按55 mg/kg腹腔内注射STZ溶液(%无菌枸橼酸钠缓冲液新鲜配制成2%溶液,调pH=,过滤除菌)。

8的注射
随机取对照组和糖尿病模型组大鼠各30只, ml或10-6mol/K8 ml,于1、2及3 d后各时间点处死大鼠10只,取血清及胰腺组织-80℃冻存待用。
血清胰岛素及血糖的测定
各组血清胰岛素浓度采用125I放射免疫法进行检测。各组SD大鼠于造模前后和给药前后采用血糖仪(德国罗氏诊断公司)检测尾静脉血血糖浓度。
蛋白样品的制备
取50 mg胰腺组织加入300 μl裂解液(8 mol/L尿素+%Biolyte+%CHAPS+15 μl PMSF),剪刀剪碎并用小圆头玻棒研磨,冰上裂解30 min,12 000 r/mim离心60 min。取上清液用Bradford法测蛋白浓度,分装,-80℃冻存。