文档介绍：GABA受体基因转染对癫痫大鼠海马CX32表达的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:孟红梅王赞崔俐张淑琴林卫红
【摘要】目的探讨在下丘脑乳头体上核内转染γ氨基丁酸(GABA)受体基因后对海人酸(KA)致痫大鼠海马区缝隙连接蛋白32(CX32)表达的影响。方法在右侧杏仁核内注射KA制备癫痫动物模型作对照组,GABA基因转染组则利用仙台病毒(HVJ)脂质体转染法预先在下丘脑的乳头体上核内转染被脂质体包被的GABA受体基因,48 h后在杏仁核内注射KA,两组大鼠分别进行CX32原位杂交观察。结果 GABA基因转染组大鼠CX32表达在各个时程均有下降。结论下丘脑内转染GABA受体基因后可以抑制癫痫发作的程度。
【关键词】癫痫;海人酸;缝隙连接蛋白
对于难治性癫痫目前主要是手术治疗,但常常因为创伤较大而不易为患者接受。随着基因技术的发展,人们开始试图利用基因转染技术进行局部药物注射,以阻断癫痫的传播通路。在癫痫的形成过程中海马起重要作用,癫痫波传播的主要通路是沿着内嗅皮层传导到海马,另外还有一些旁路因素对癫痫的传播产生影响,如下丘脑的乳头体上核也发出一些联系纤维与海马相关联。本研究采用大鼠杏仁核内注射海人酸(KA)作为癫痫动物模型〔1〕,通过仙台病毒(HVJ)
脂质体基因转染技术,将γ氨基丁酸(GABA)受体基因转染到下丘脑的乳头体上核,观察其对于大鼠海马区缝隙连接蛋白32(CX32)表达的影响。
1 材料与方法
材料
Wistar雄性大鼠22只(体重250~300 g)、GABAmyc融合基因、脂质体、HVJ、玻璃管、微量注射器、立体手术定位仪、手术器械。
实验动物分组
分为3组:正常对照组、KA对照组及GABA基因转染组(详见动物模型制备)。
HVJ脂质体基因转染技术〔2〕
将被脂质体包被的GABA受体与事先用紫外线照射破坏自身基因的HVJ在37℃条件下反应,制成HVJ脂质体,进而再与细胞膜直接融合将DNA高效导入细胞内。
动物模型制备
KA对照组将大鼠麻醉固定,立体定位仪下在右侧杏仁核内注射KA μg( mm, mm, mm)。GABA基因转染组则在KA注射前48 h预先将GABA mRNA注射到下丘脑的乳头体上核( mm, mm, mm)。
CX32原位杂交染色
各组大鼠分别在注射KA后3、6、24、48 h、3、7 d取海马区进行原位杂交染色并观察。
统计学分析
各组间比较采用方差分析,成组数据的比较采用t检验。
2 结果
CX32主要分布于神经细胞内。正常海马各区及皮层CX32阳性细胞稀少,胞浆与胞膜着色。KA注射3 h后大鼠的海马各区CX32的表达迅速增多,并持续上升,第3天达高峰,后逐渐下降,其中CA3区表现明显,CA2和齿状回(DG)区变化不明显;GABA基因转染组大鼠CX32表达与KA对照组相比其阳性细胞数明显减少,有显著性差异(P<)。见图,表1。表1 各组大鼠海马CX32免疫反应阳性细胞数的比较(略)
3 讨论
基因治疗的关键是基因转移,