IgA肾病小鼠肾组织鞘氨醇激酶、 内皮分化基因表达及意义.doc

文档介绍：IgA肾病小鼠肾组织鞘氨醇激酶、内皮分化基因表达及意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:程军, 张雯, 陶筱娟, 方鲁, 于健宁
【摘要】目的: 探讨鞘氨醇激酶(SPK)与磷酸鞘氨醇(SPP)受体EDG3、 EDG5在IgA肾病(IgAN)小鼠肾皮质中的基因表达情况。方法: 复制IgAN小鼠模型, 应用实时荧光定量PCR检测肾皮质SPK与SPP受体EDG3、 EDG5的mRNA表达。结果: IgAN小鼠肾皮质中SPK与SPP受体EDG3、 EDG5的mRNA均高表达, 其中SPK与α平滑肌肌动蛋白(αSMA)成正相关。结论: 在IgAN肾组织中, SPK、 EDG3及EDG5可能在系膜细胞的增殖和发生表型改变的信号转导过程中发挥着重要作用。
【关键词】 IgA肾病鞘氨醇激酶荧光实时定量PCR
鞘氨醇激酶(sphingosine kinase, SPK)是细胞内合成1磷酸鞘氨醇(sphingosine 1phosphate, SPP)的主要限速酶, 同时也是重要的细胞信号转导分子。SPP是新近发现具有重要生理功能的另一种膜磷脂代谢产物。SPP与神经酰胺、鞘氨醇之间在细胞内的代谢平衡决定着细胞的生存与死亡, 多种生长因子可激活细胞内SPK, SPP合成增加, 从而可拮抗神经酰胺引起的细胞凋亡以及产生其他多种生物效应[1], 如刺激细胞增殖、抑制细胞凋亡、调节细胞的形态分化等, SPK是调控三者之间平衡的关键酶[2]。最近发现SPP刺激肾脏系膜细胞的增殖[3, 4], 细胞外SPP激活系膜细胞主要是通过膜受体EDG3/EDG5/蛋白途径, 促进系膜细胞增殖。IgA肾病(IgA ne
phropathy, IgAN)是我国发病率最高的系膜增殖性肾病, Katsuma等[5]在HIGA小鼠(一种自发IgAN模型)中发现SPPEDG5通路在系膜细胞增殖过程中起着重要作用。本研究中选用小鼠IgAN模型, 运用实时荧光定量PCR检测了肾皮质SPK及其EDG3、 EDG5表达, 发现IgAN小鼠肾皮质中SPK及其EDG3、 EDG5均存在高表达, 而且SPKmRNA与αSMAmRNA表达成正相关。
1 材料和方法
材料清洁级BALB/c系雌性小鼠(质量10±30 g), 由浙江大学实验动物中心提供, 尿检潜血及蛋白均阴性。动物房温度控制在(23±5)℃, 相对湿度(60±15)%, 噪音低于55分贝。总RNA 提取试剂为TRIzol为Gibco公司产品, 反转录试剂盒Super scriptTM Ⅱ Rnase H Reverse Transcriptase为Invit rogen公司产品, DNA 纯化试剂盒购自申能博彩公司, 含SYBR GreenⅠ的PCR MasterMix为BioRad公司产品。凝胶成像系统Alpha ImagerTM 2200, 为Alpha Innotech公司产品, 电泳仪和iCycler iQTM荧光实时多波长PCR检测系统为BioRad公司产品。
方法
动物分组与造模雌性BALB/c小鼠16只随机分2组: 正常组、模型组, 每组8只。正常组以新鲜煮沸后冷却后的蒸馏水为日常饮用水; 模型组按