文档介绍：IL15和TGFβ对人PBMC上LAIR1表达的调节作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:张晓姝, 曹奇志, 王春艳, 张骞, 薛江楠
【摘要】目的: 研究细胞因子IL15和TGFβ对人外周血单个核细胞(PBMC)上LAIR1表达的调节作用。方法: 以IL15和TGFβ作用于人PBMC, 流式细胞术(FCM)检测PBMC上白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR1)的表达。结果: 与单独PHA刺激组相比, IL15刺激72 h后细胞免疫荧光强度明显减弱(), 阳性细胞百分率也有所下降; TGFβ刺激的PBMC上LAIR1表达水平也有所降低。结论: IL15和TGFβ都可以下调PHA活化PBMC上LAIR1的表达。
【关键词】外周血单个核细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1 IL 15 TGF β流式细胞术
澳大利亚的Burns等[1]用人的NK细胞免疫小鼠获得1株单克隆抗体(mAb) , 它能显著抑制人NK细胞、 CTL以及单核细胞的杀伤作用。1999年鉴定其所识别的分子()为一种免疫细胞抑制性受体, (leukocyte
associated immunoglobulinlike receptor1, LAIR1)以及Poggi等报道的p40为同一分子[2]。2004年12月召开的第8届国际人类白细胞分化抗原大会组委会(HLDA8)已将LAIR1/[3]。LAIR1是胞质区含有两个ITIM模体的跨膜糖蛋白,能募集含有SH2的酪氨酸磷酸酶1和酪氨酸磷酸酶2(SHP1、 SHP2), 发挥抑制功能[4]。LAIR1广泛表达于白细胞, 包括NK细胞、 T细胞、 B细胞、单核/巨噬细胞以及DC细胞, 提示LAIR1分子可能广泛参与免疫应答过程。

本研究中通过流式细胞术(FCM)探讨了细胞因子IL15和TGFβ对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)上LAIR1表达的影响作用, 为进一步研究LAIR1的功能奠定基础。
1 材料和方法
材料 LAIR1单克隆抗体(mAb)由第四军医大学金伯泉教授惠赠。FITC标记羊抗鼠IgG购自HBT公司。淋巴细胞分离液为天津TBD公司产品。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。小牛血清为杭州四季青公司产品。IL15和TGFβ购自法国Digclone公司。PHA为Sigma公司产品。
方法
PBMC分离和培养无菌抽取6个健康人的静脉血各5 mL, 加肝素250 U抗凝。采用Ficoll
密度梯度离心法分离PBMC。洗涤2次后加入含有100 mL/L胎牛血清的RPMI1640重悬细胞, 调至细胞密度5×108/L, 置于24孔培养板中, 37℃、 50 mL/L CO2孵箱中培养。
细胞因子IL15和TGFβ对PBMC的刺激实验分为4组, 每组3复孔, 分别加入如下试剂: IL15+PHA; TG