文档介绍：mig14对伤寒沙门菌在高渗应激早期基因表达的调节
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:夏秋风, 邹昕, 杜鸿, 高宇琳, 黄新祥
【摘要】目的: 探查伤寒沙门菌mig14在高渗应激下对若干基因表达的调节作用。方法: 用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌mig14基因缺陷变异株,用基因芯片分析高渗应激早期野生株和mig14缺陷株基因表达差异,并对部分结果采用实时荧光定量PCR进行验证。结果: 成功制备伤寒沙门菌mig14缺陷株,高渗应激早期mig14变异株与野生株相比有77个基因表达下调和72个基因表达上调。结论: mig14可能是一种调节基因,主要参与调节细菌的物质和能量代谢。
【关键词】伤寒沙门菌; mig14; 高渗应激; 基因芯片分析
[Abstract] Objective: To explore the function of mig14 of Salmonella enterica serovar Typhi in response to hyperosmotic : A mig14 gene deleted mutant of serovar Typhi was constructed using the homologous bination method by means of a suicide plasmid; the difference of the gene expression between the wild strain and the mig
14 mutant at earlystage of hyperosmotic stress was investigated by genomic microarray assay and partially confirmed by real time quantity reverse transcription PCR. Results: essfully constructed a mig14 mutant; about 77 and 72 genes were downand upregulated respectively at earlystage of hyperosmotic stress in mig14 mutant. Conclusion: mig14 may be a regulator, may primally regulate the substance metabolism and energy metabolism of Salmonella enterica.
[Key words] Salmonella enterica serovar Typhi; mig14; hyperosmotic stress; DNA microarrays
原核生物的信号转导可由膜蛋白和胞内的效应调节蛋白构成的双组分调控系统执行。PhoP/PhoQ是许多革兰阴性菌都有的一个重要的双组分调节系统,在低镁或酸性条件下,膜上的PhoQ被激活发生磷酸化,后者再特异性地作用于胞内的PhoP,使其磷酸化激活[1]。磷酸化的PhoP可激活slyA,mig14等基因,这些基因与细菌耐受酸性环境有关[2, 3]。Brodsky等[2]已经证明mig14能介导伤寒沙门菌抵抗多种抗菌肽的杀伤作用,但机制目前还不清楚。从基因序列分析发现,mig14与DNA调节性蛋白基因有较小的同源性,提示它也可能是一种调节蛋白。有研究表明,在沙门菌高渗应激早期mig14基因表达量明显增高[4],因此怀疑mig14在沙门菌耐受高盐渗透压环境中可能发挥着重要作用。本研究拟用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌mig
14基因缺陷变异株,并通过用全基因组芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和mig14缺陷株在高渗应激早期的基因表达谱差异,以分析高渗应激条件下mig14在伤寒沙门菌中的作用。
1 材料与方法
材料
菌株和质粒伤寒沙门菌野生株GIFU10007,大肠埃希菌SPY372λpir, 大肠埃希菌DH5α,pMD18T载体,自杀质粒pGMB151。
引物根据NCBI公布的伤寒沙门菌Ty2基因序列信息,在mig14基因上游和下游设计两对特异性PCR引物:P1A/P1B和P2A/P2B,P1A和P2B含BamHⅠ酶切位点,P1B和P2A含BglⅡ酶切位点。设计的上游片段F1长459 bp,下游片段F2长857 bp。根据tre