文档介绍：MLH1基因在喉鳞癌中的表达及意义
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【摘要】目的:探讨人喉鳞癌中MLH1基因的表达及意义。方法:采用免疫组化法分别检测20例喉癌组织及癌旁组织MLH1基因的表达。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对MLH1基因的表达进行定量分析。结果:喉癌癌细胞核和细胞质中可见少量的棕黄色颗粒, MLH1基因表达弱;对照组中,细胞核及细胞质中可见一些棕黄色颗粒, MLH1基因表达强。图像分析结果显示: ±, ±;±, ±,经单因素分析喉癌组与对照组比较,差异有显著性()。结论:MLH1基因在喉癌组织中表达降低,可能在喉癌的发生机制中起了一定的作用。
【关键词】喉鳞癌; 人类错配修复基因; 免疫组织化学
MLH1是人类错配修复基因( human mismatch repair gene, hMMR)家族中一个重要的基因,MMR对保持遗传信息的完整性和稳定性,避免遗传突变的产生具有重要作用,MLH1的功能缺陷被认为是肿瘤发病的重要机制, 成为近年来研究的热点。研究表明,MMR与结直肠癌、食管癌、胃癌、宫颈癌等关系密切[1,2],但在喉癌中的表达状况报道甚少。本实验通过免疫组化方法检测喉癌和癌旁组织中MLH1基因的表达状况,探讨它与喉癌临床病理特征的关系。
1 材料和方法
材料
材料来源收集武汉市中心医院病理科2007~2009年喉癌存档蜡块20例,其中男性18例,女性2例。所有切片经病理学专家诊断为喉鳞状细胞癌,所有病例均为首次发病,并且均是术前未接受过放疗、化疗的病人。另取瘤组织周围组织5例(癌旁组织选自手术切除标本远离肿瘤端,切缘经病理证实未见癌细胞)作对照。
材料分组将实验分为喉癌组和对照组。
主要试剂和仪器
主要试剂浓缩型鼠抗人MLH1基因单克隆抗体,(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司);DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。
主要仪器 YWY781型医用微波仪,250 W,50 Hz (浙江临安电子器材厂生产);家用高压锅;电热恒温干燥箱(湖北黄石医疗器械厂生产);显微镜成像系统(Olympus公司)。
方法
蜡块切片厚5μm,贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上,置于烤箱烤干待用。
免疫组织化学SP法检测MLH1相关抗原
具体步骤:
① 4μm组织切片常规脱蜡至水后, PBS(pH )漂洗3×3 min;
②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法),室温自然冷却后, PBS(pH )漂洗5×3 min;
③滴加3%过氧化氢,37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性, PBS(pH )漂洗3×3 min;
④正常羊血清3