文档介绍：Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:王春华郑志竑, 杨卫忠, 陈春美
【摘要】目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组()。在各级星形细胞瘤中, Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ~Ⅲ级显著高于Ⅳ级(),Hes5的表达在2组间差别无统计学意义()。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好(k=),与Hes5的表达一致性差(k=)。结论 Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。
【关键词】蛋白质类信号传导基因表达星形细胞瘤脑肿瘤细胞分化免疫组织化学
Notch信号在神经系统的发育过程中对细胞增殖和分化的调控起关键性作用。该信号通路的失调与多种神经系统肿瘤形成密切相关[1]。神经胶质细胞瘤是最常见的原发性脑肿瘤,已有研究报道,在神经胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均检测到Notch1受体的异常表达[2
6],但Notch信号通路中其主要的下游信号分子Hes1和Hes5在胶质瘤中表达情况及其与胶质瘤发生、发展的相关性以及作用机制尚不明确。本实验通过免疫组织化学方法检测Notch1与Hes1、Hes5在正常脑组织和星形胶质瘤组织中的表达情况,并分析三者的相互关系,旨在探讨NotchHes信号途径与星形胶质瘤发生、发展的关系及其可能的作用机制。
1 材料与方法
材料
组织标本收集福建医科大学附属协和医院神经外科2006年1月-2008年6月手术切除的胶质瘤标本62例,男性39例,女性23例,年龄(±)岁(10~72岁)。均经病理证实。按WHO(2004)分型标准分类:Ⅱ级21例,Ⅲ级20例,Ⅳ级21例。另收集7例脑外伤内减压手术中切除的脑组织作为对照。
主要试剂兔抗人Notch1多克隆抗体、兔抗人Hes1多克隆抗体、兔抗人Hes5多克隆抗体(美国Chemicon公司)。二步法免疫组化检测试剂(北京中杉金桥生物技术有限公司);DAB显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。
方法
免疫组织化学染色 10%福尔马林液固定,常规石蜡包埋、切片、脱蜡和煮沸抗原修复,采用免疫组织化学二步法分别检测Notch1和Hes1、Hes5蛋白的表达,抗体稀释倍数均为1
∶200。以PBS代替一抗作为阴性对照, 用已知的阳性片作为阳性对照。常规DAB显色,苏木素复染,封片后光镜下观察。
结果判定细胞核或细胞质中均可见Notch1、Hes1、Hes5三者表达。在染色均匀的肿瘤区随机选择5个以上高倍视野,计数≥500个细胞。根据细胞着色深浅程度及着色细胞百分率评分:基本不着色为0分,着色淡为1分,着色较深为2分;着色细胞数占计数细胞总数的