文档介绍：白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞周期、凋亡及端粒酶活性的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:高超,刘颖,蔡晓敏,郝兴芝
【摘要】目的研究中药白花蛇舌草(Hedyotic diffusa,HD)对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨HD抑制Hela细胞肿瘤活性与端粒酶的关系。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的Hela细胞,用PCR-TRAP-ELISA方法定量检测HD处理Hela细胞后其端粒酶活性水平,同步采用流式细胞仪检测细胞周期的变化及凋亡率。结果 Hela细胞端粒酶呈阳性,一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可使Hela细胞阻滞于S期,并可诱导其凋亡,而端粒酶活性明显降低。结论 HD可能通过改变Hela细胞周期分布(S期阻滞)并同时诱导细胞凋亡,下调其端粒酶活性而达到抗肿瘤作用。
【关键词】白花蛇舌草;宫颈癌Hela细胞;细胞周期;凋亡;端粒酶
近年来一些学者对白花蛇舌草(Hedyotic diffusa,HD)的抗肿瘤作用进行了研究,其抗肿瘤作用基本得以肯定[1-4],但对其作用机制尤其是分子生物学机制认识不深入。端粒酶的表达和细胞凋亡在肿瘤的发生和发展中起重要的作用,如何诱导肿瘤细胞凋亡和调节端粒酶的活性已成为肿瘤治疗的一条新途径。HD具有明显的体内外抗肿瘤作用,这种作用是否与引起肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞和端粒酶活性抑制有关,目前文献报道不多。本研究以人宫颈癌Hela细胞为研究对象,用PCR产物的聚丙烯酰胺电泳及银染定性检测端粒酶活性,PCR-TRAP-ELISA方法定量检测HD处理 Hela细胞后其端粒酶活性水平变化,同步采用流式细胞仪检测细胞周期的变化及凋亡率,以探讨HD抗肿瘤作用机制。
1 材料和方法
材料
Hela细胞培养
Hela细胞由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供,培养液为含10% 胎牛血清、100×103 U/L青霉素、 g/L链霉素的RPMI 1640,用100 ml培养瓶,置5%CO2、37℃、饱和湿度的恒温箱中培养,细胞达80%~90% % 胰蛋白酶消化后传代。实验期间不断冻存,全部实验均用指数生长期细胞。
试剂
胎牛血清(天津血液研究所), 胰蛋白酶、核糖核酸酶(RNase)、碘化丙啶(PI)、PCR-TRAP-ELISA端粒酶活性检测试剂盒均购自华美生物工程公司。
药物
HD(江西天师中药集团余江制药厂)200 g加蒸馏水2 000 ml温火煎煮60 min,加热沸腾30 min ,网筛过滤去渣,滤液离心20 min,取上清液浓缩为200 ml, m过滤除菌,获1 kg/LHD提取液备用。
实验方法
药物处理
% 胰酶消化后,用RPMI 1640培养液调细胞密度为1×108个/L,每培养瓶各加1 ml,再各加入培养液6 ml,置5% CO2、37℃恒温培养箱中培养,待细胞生长达70%融合时更换培养液同时加入HD提取液,使药物终浓度为20、40、80 g/L,不同浓度培养相同时间。设加入等量培养液者为实验对照组。
流式细胞仪(FCM)分