百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用.doc

文档介绍：百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:许惠琴,王华富,高钦,蔡宝昌
【摘要】【目的】观察百合知母汤含药血清对氯化镉(CdCl2)致大鼠卵巢颗粒细胞(GC)损伤的影响。【方法】(1)分别选用23 d、3月和12月龄雌性SD大鼠各5只,取卵巢进行GC计数,连续观察10 d内GC的生长情况,采用噻唑蓝(MTT)比色法于490 nm波长处测定光密度(D)值,筛选最适卵巢GC。(2)于最适卵巢GC体外培养的第3天加入终浓度分别为10、20、40、60、80 μmol/L的CdCl2刺激液,37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养48 h后,采用MTT法观察细胞生长情况,筛选CdCl2刺激液的最适浓度。(3)将筛选出最适的卵巢GC体外培养 72 h后,在96孔板内分别加入最适浓度的CdCl2刺激液及终浓度分别为体积分数125%、25%、5%、10%、20%的大鼠百合知母汤含药血清,依据含药血清浓度由低至高分为5组,同时另设对照组:①空白对照组:体积分数10%DMEM培养液,②模型组:体积分数10%DMEM培养液+最适浓度CdCl2刺激液,③空白血清组:空白血清+最适浓度 CdCl2刺激液。继续培养48 h后,采用MTT比色法测定D值,观察百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC以及对CdCl2致卵巢GC损伤后的影响。【结果】23 d龄大鼠卵巢GC数量多、形态好,呈指数生长,23 d为最适生长时间。CdCl2浓度与卵巢GC的活性呈剂量依赖性关系,随浓度增加而损伤加重,其中浓度为40
μmol/L CdCl2培养液中的GC细胞边缘出现皱缩,为最适CdCl2刺激液浓度。百合知母汤含药血清对卵巢GC生长有促进作用,能抵抗40 μmol/L CdCl2刺激液对GC的损伤作用。【结论】百合知母汤含药血清保护大鼠卵巢GC的作用与其能拮抗CdCl2的损伤和增加卵巢GC的活性和数量有关。
【关键词】百合知母汤/药理学;围绝经期综合征/中药疗法;血清药理学;细胞培养
百合知母汤出自张仲景《金匮要略》,是临床治疗围绝经期综合征的基本方剂。目前越来越多的研究将围绝经期综合征与妇女卵巢功能衰退和细胞凋亡联系起来,认为卵巢颗粒细胞(GC)凋亡,触发卵泡闭锁,颗粒细胞产生雌激素减少促进了性腺激素受体的减少从而引发本病[1-2]。因此本实验观察了百合知母汤含药血清对体外培养的卵巢GC的影响,以及对氯化镉(CdCl2)致卵巢GC损伤后的作用,现报道如下。
1材料与方法
11实验动物23 d、3月和12月龄清洁级雌性SD大鼠,由扬州大学比较医学动物中心提供,动物合格证号:SYXK(苏)20020053。
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2药物及试剂百合知母汤(百合与知母质量比为3∶1),制成含生药量为08 g/mL的浓缩液。DMEM为美国GIBCO公司产品,小牛血清(DBCS)为JRH biosciences公司产品。噻唑蓝(MTT)由Ultra pure grade, Amresco分装,临用前用磷酸盐缓冲液(PBS)配制成50 mg/L MTT溶液,于4℃冰箱保存。二甲基亚砜(DMSO)为上海久亿化学试剂有限公司产品。注射用血促性素(PMSG)为宁波市三生药业有限公司产品(批号:0