低剂量顺铂节律化疗抗血管生成作用的实验研究.doc

文档介绍：低剂量顺铂节律化疗抗血管生成作用的实验研究
作者:牟坤沈方臻肖文静李明君
【摘要】目的探讨低剂量顺铂节律化疗对体内外血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测低剂量顺铂节律化疗对人脐静脉内皮细胞HUVECs、人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期观察其对HUVECs、HepG2生长的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果低剂量顺铂(~ μg/L)持续作用24、48、72 h,对HUVECs具有抑制增殖作用, ~ μg/L 范围内呈现剂量和时间依赖性,低剂量顺铂组的吸光度值明显低于对照组,差异有显著意义(F=~,q=~,P<), μg/L时对内皮细胞HUVECs增殖抑制作用达到饱和。相同条件下,低剂量顺铂对人肝癌细胞株HepG2则未显示出抑制作用,实验组的吸光度值与对照组比较差异无显著意义(F=~,P>)。流式细胞仪检测显示低剂量顺铂组处理HUVECs 细胞48 h 后与对照组比较,随顺铂浓度增大,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多,其差异有显著性(F=~,q=~,P<);低剂量顺铂组处理HepG2细胞48 h后与对照组比较,各期细胞比例无明显改变,差异无显著意义(F=~,P>)。低剂量顺铂持续作用对鸡胚尿囊膜的血管发生具有显著影响,低剂量顺铂组抑制百分率为(±)%~(±)%,与生理盐水对照组比较差异有显著性(F=2
,q=~,P<)。结论低剂量顺铂节律化疗体外有抑制血管内皮细胞生长、体内有抑制血管生成作用。
【关键词】顺铂;药物疗法;新生血管化,病理性;绒毛尿囊膜
20世纪70年代初,FOLKMAN[1]提出通过抑制肿瘤新生血管的生成来抑制肿瘤的生长,为肿瘤的治疗开辟了新的思路。近几年研究显示,持续或高频率给予比最大耐受剂量(MTD)小得多的单次剂量更有效,不仅能降低毒性反应,而且能提高抗肿瘤效果[2]。此外,这种方案适合与靶向药物及毒性相对低的抗癌药物合用。最新的定义将此称为“节律化疗”,即高频率甚至每天1次给予比MTD低得多的化疗药物,且不伴较长的间歇期。顺铂为一含铂无机络合物,抗瘤谱广、疗效高,具有与多种抗癌药协同作用的优点,是常用的化疗药物,但其毒副作用较大,大剂量、多疗程应用可引起体质量下降及肝脏、肾脏毒性等,并可成为不可逆损伤,其是否有抗血管形成作用目前国内外少见报道。本研究探讨低剂量顺铂节律化疗对体内外血管生成的抑制作用, 为临床上应用低剂量顺铂抗肿瘤血管生成治疗提供实验依据。现将结果报告如下。
1 材料与方法
材料
细胞株及细胞培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 由美国Sciencecell公司生产, FBS、100 kU/L青霉素、100 mg/L链霉素的ECM条件培养基常规培养,第4~6代细胞用于实验。HepG2细胞系本实验室常规培养, FBS、100 kU/L青霉素、10