文档介绍：当归浓缩丸提取物对α葡萄糖苷酶活性的抑制作用
【摘要】目的: 从当归浓缩丸中提取α葡萄糖苷酶抑制剂. 方法: 利用冷浸得到当归浓缩丸水提物;取部分水提物经醇沉后,浓缩上清液得到其流浸膏;从其水提醇沉中得到粗当归多糖. 体外实验观察了当归浓缩丸三种提取物对α葡萄糖苷酶活力的影响,有效成分鉴定以及当归浓缩丸流浸膏的动力学类型. 结果: 当归浓缩丸流浸膏对α葡萄糖苷酶有抑制作用,呈量效关系,氨、α萘酚反应阳性;其流浸膏对该酶抑制类型为竞争性抑制. 结论: 当归浓缩丸流浸膏对该酶活力抑制作用可能与含黄酮苷类化合物有关.
【关键词】当归浓缩丸α葡糖苷酶类酶抑制剂
0引言
在葡萄糖耐量缺损、2型糖尿病早期的治疗中,α葡萄糖苷酶抑制剂作为我国糖尿病防治指南推荐的一线药物,其作用机制是延缓单糖吸收,降低餐后高血糖. 对防止糖毒作用十分重要. 近期据文献报道,当归多糖对四氧嘧啶糖尿病小鼠有降血糖作用[1],其降糖机制是否与抑制α葡萄糖苷酶活性,延缓单糖吸收有关呢?我们利用具有单一当归成分的当归浓缩丸,对此展开进一步研究.
1材料和方法
葡萄糖苷酶,购于Sigma公司;对硝基苯酚α吡喃葡萄糖苷(pNPG),购于德国Merck公司;还原型谷胱甘肽,KHK进口分装;拜唐苹,拜耳医药保健有限公司(成分: 阿卡波糖,每片含50 mg);当归浓缩丸,河南省宛西制药股份有限公司( g). UV7500可见光分光光度计,上海天美科学仪器有限公司;3650
紫外分析仪,上海科艺光学仪皿厂;SH2D(Ⅲ)循环水式真空泵,巩义市英山路予华仪器厂.
g/L,冷浸,研磨,3500 r/min,10 min离心,得到上清液,备用. 取上述水提液加入乙醇至乙醇浓度达50%,混匀,4℃冰箱静置过夜后经3500 r/min,10 min离心,将得到的上清液部分置于坩埚内,在75℃水浴中挥尽乙醇,浓缩成流浸膏备用;并把离心得到的沉淀部分用950 mL/L乙醇、无水乙醇各洗2遍,丙酮、乙醚各洗1次得到粗多糖. 将提取液滴至瓷反应板上,加数滴三氯化铁试剂,观察颜色反应. 将提取物滴至滤纸上,经浓氨水上熏数分钟,立即放到紫外灯下观察是否有黄色荧光反应. 取提取物1 mL加入数滴双缩脲试剂,混匀观察颜色反应. 取提取液1 mL加入1~2滴α萘酚试剂,再延管壁加入数滴浓硫酸,观察颜色反应. 取少量提取液加入数滴碘液试剂观察颜色反应[2-3].
葡萄糖苷酶活性测定[4]反应系统为67 mmol/ L磷酸钾缓冲液(37℃,pH ) mL,3 mmol/L谷胱甘肽溶液50 μL, μkat/L α葡萄糖苷酶溶液50 μL,混匀,37℃水浴保温10 min后,加入20 mmol/L pNPG溶液30 μL,再置原水浴中继续保温10 min后,经80℃水浴中灭活, mol/ L Na2CO3溶液10 mL冷却后,于波长400 nm处测定在酶的作用下释放出对硝基酚(pNP)A值. 其中酶活力单位定义:37
℃,pH ,反应体系中pNP在400 nkat. 空白