文档介绍：紫外诱变复合重金属离子抗性突变选育霉酚酸高产菌株
作者:娄忻贾啸静刘胜利张华
【摘要】以霉酚酸产生菌1321#为出发菌株,采用紫外线诱变并复合重金属Cr6+、Cu2+抗性株筛选,%的164#高产菌株。经发酵配方优化,%,显示出了高产潜力。
【关键词】霉酚酸; 诱变; 重金属离子; 抗性筛选
ABSTRACT A mycophenoilc acid (MPA) producing strain Penicillium pactum #1321 was treated by UV, followed by resistance selection with heavy metal Cr6+ and Cu2+. A stable strain #164 was obtained with the potency of MPA higher by % than starting strain in shaking culture. The potency was further improved by % in the optimized fermentation medium.
KEY WORDS Mycophenoilc acid; Mutagenesis; Heavy metal ion; Resistant screening
霉酚酸(mycophenoilc acid,MPA)为短密青霉(Penicillium pactum)产生的抗真菌、抗肿瘤并具免疫抑制作用的抗生素[1]。MPA是次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶的可逆性抑制剂,能选择性地抑制淋巴细胞活性,它的2-乙基酯类衍生物——霉酚酸酯(MMF)是新一代免疫抑制剂,在临床器官移植和自身免疫性疾病的治疗方面展示了良好的应用前景。做为合成MMF的前体化合物,提高MPA的工业化水平对于生产企业来说十分重要。
MPA产生菌原始菌株的产量有限,其高产菌株的选育研究近年来渐成热点。张琴等[2]报道采用紫外线及亚硝基胍诱变产生菌,以MPA和三氟乙酸为抗性筛选标记,筛选到了高产突变株;杨亚勇等[3]报道紫外线和亚硝酸复合诱变MPA产生菌的原生质体,经原生质体再生获得了高产菌株。本文报道了应用紫外诱变与定向筛选重金属离子抗性株相结合的方式,进行MPA育种研究,并获得了高产稳定的突变株。
1 材料与方法
出发菌种
短密青霉(Penicillium pactum)1321#。
培养基及培养条件
(1)分离及斜面培养马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基,26℃培养5d~7d。
(2)种子培养淀粉10g,葡萄糖5g,酵母粉3g,氯化钠1g,,碳酸钙1g,自来水1000ml,自然pH。26℃,220r/min摇床,培养2d。
(3)发酵培养淀粉12g,蔗糖50g,玉米浆50g,鱼粉蛋白胨2g,酵母粉13g,硫酸铵4g,磷酸二氢钾1g,氯化钙2g,,自来水1000ml,自然pH。26℃,220r/min摇床,培养7d。
菌种诱变与筛选
(1)紫外照射单因子处理由出发菌株的成熟斜面制得单孢子悬液置平皿中,紫外灯(30W,波长254n