文档介绍：杠板归提取物抗单纯疱疹病毒-I型的药理作用研究
作者:张长城,黄鹤飞周志勇,袁丁
【摘要】目的研究杠板归提取物体外抗单纯疱疹病毒-1( HSV-1)的作用,探讨杠板归抗疱疹病毒的药理作用与有效部位。方法利用溶剂法和色谱法从杠板归中提取分离出4个部位,MTT法检测杠板归各提取物的病毒抑制效果,以病毒抑制率和治疗指数(TI)为评价指标,比较各部位体外抗病毒的效果。结果杠板归醇提部位与大孔树脂醇洗部位抗病毒作用最强,药物浓度在8 μg·ml-1以上时,对HSV的抑制程度可达50%以上,与阳性对照药阿昔洛韦无统计学差异(P>)。结论杠板归提取物体外具有较好的抗HSV-1作用,其有效成分为黄酮类化合物,具有进一步研究开发价值。
【关键词】杠板归; 单纯疱疹病毒-1; 有效部位
杠板归系为蓼科蓼属Polygonaceae植物杠板归Polygonum perfoliatum ,又名贯叶蓼,具有清热解毒、祛痰止咳、利湿消肿、散瘀止血等功效,主治痈肿疔疮、丹毒等,始载于《万病回春》。民间习用杠板归鲜品或干品捣烂外敷治疗带状疱疹等疾病,具有良好的效果。现代药理研究表明,杠板归具有抗炎、抑菌、抗肿瘤等活性[1,2]。目前对杠板归抗病毒活性的研究较少,其药理活性部分与活性成分尚不明确。本文通过研究杠板归各提取部位体外抗HSV-1活性研究,探讨杠板归抗疱疹病毒活性的主要活性部位与可能活性成分。
1 材料与仪器
药物杠板归鲜品采自湖北宜昌市,经三峡大学医学院中药学教研究室谭复成教授鉴定。阳性对照药物:阿昔洛韦(ACV,上海通用药业股份有限公司)。
试剂与仪器MTT(4,5二甲基噻唑-2,5-二苯基四唑溴化物)为SIGMA公司产品;RPMI 1640培养基为GIBICO公司产品;二甲基亚砜(DMSO)购自上海菲达有限公司;小牛血清购自三利公司;所用化学试剂均为国产分析纯。超净工作台(美国Forma公司);TGL-16C型高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂);DG3022-A型酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂)。
细胞与病毒Hep-2细胞为武汉大学典型培养物保藏中心提供。细胞生长液为RPMI-1640,加10%小牛血清,100 U/ml青霉素,100 μg/ml链霉素。细胞维持液中加2%新生小牛血清。单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)SM44株,武汉大学医学院病毒学研究所提供,经Hep-2细胞活化增殖,CPE达75%以上(+++~++++)收获,测定病毒滴度为TCID5010- ml,分装后于-80
℃冻存备用,实验用病毒浓度为1 000 TCID50。
2 方法
供试品的制备取杠板归干燥药材50g,用石油醚脱脂后,用20倍量75%乙醇微沸回流提取2次,每次2 h,提取液减压浓缩、干燥,得醇提物(干燥后得醇提部位);醇提物加水溶解,通过D101大孔树脂,水洗后经75%乙醇溶液洗脱,得到水洗部位及醇洗部位;经乙醇提取后的药渣用水回流提取两次,每次2 h,减压浓缩、干燥得水提部位。以芦丁(购于中国药品生物制品检定所)为标准对照品,采用硝酸铝络合分光光度法[3]%。过滤除菌分装,实验前用含2%的小牛血清的1640培养基稀释到