文档介绍：口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞转移潜能的影响
作者:顾帝水孔霞陈锦黄培春
【摘要】 E-2Z转移潜能的影响。方法用细胞-基质粘附实验、E-2Z细胞粘附、运动及侵袭能力的影响;免疫细胞化学法检测其对MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白表达的影响。结果口虾蛄提取物能以量-E-2Z细胞体外运动及侵袭能力(P<),E-2Z细胞-基质粘附能力无影响(P>)。且口虾蛄提取物能降低MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白强阳性表达率(P<)。E-2Z细胞的运动及侵袭能力,其机制可能与下调CD44v6、MMP-9和MMP-2蛋白表达有关。
【关键词】口虾蛄口虾蛄提取物鼻咽肿瘤肿瘤转移
近年来,研究发现海绵、海藻及珊瑚等多种海洋生物均含丰富的抗瘤活性物质[1],提示从海洋生物筛选抗肿瘤新药具有广阔的前景。口虾蛄(Oratosquilla),又称濑尿虾,属于节肢动物门,是日常食用的海洋生物之一。目前,有关口虾蛄抗肿瘤的报道甚少。E-2Z的生长[2,3],但能否抗肿瘤侵袭及转移尚不清楚。E-2Z细胞转移潜能的抑制作用,为口虾蛄抗肿瘤作用提供实验依据。
1 材料
新鲜口虾蛄购于广东湛江港口,Matrigel(Becton Dickinson Labware,USA), Human Fibronctin(Becton Dickinson Biosciences,USA), Transwell( mm Diameter, μm Pore Size,Corning Coster Corporation, USA),鼠抗人MMP-2、MMP-9、CD44v6单克隆抗体、超敏广谱S-P试剂盒(KIT-9710)及DBA显色剂(DAB-0031)为福州迈新生物技术公司产品。
CNE-2Z为人低分化鼻咽癌细胞系,由广东医学院肿瘤研究所提供。
2 方法
口虾蛄有效成分提取与配制新鲜口虾蛄暴晒干后粉碎成粉末,用95%乙醇浸泡3次,每次浸泡液过滤混匀在56℃蒸发提纯。提纯物呈膏状, g。提取物用二甲基亚砜(DMSO)配成1 000 g · L-1,4℃保存,临用时用培养液稀释成所需浓度,以下实验均分4组:溶剂对照组、口虾蛄提取物低浓度组( mg ·L-1)、口虾蛄提取物中浓度组( mg ·L-1)及口虾蛄提取物高浓度组( mg · L-1)。
细胞- μg/孔铺于96孔培养板中,E-2Z细胞常规培养,以每孔4×104/100 μl接种,并加入不同浓度的口虾蛄提取物,每组设12个平行孔,培养8 h后倒掉培养液,结晶紫100μl/孔染色10 min,PBS洗涤3次。加入醋酸乙醇100 μl/孔,酶标仪测定A570 nm值。实验重复2次。
细胞侵袭及运动实验Transwell上室腔内加入稀释好的Matrigel(10 μg),风干过夜。24孔培养板内加入10 μg/ml纤维粘连蛋白的完全培养液(600
μl/孔)。E-2Z细胞,用含1%牛血清白蛋白的RPMI 1640制成1×106/ml细胞悬液,以100 μl/室加入上室腔,同时加入不同浓度的口虾蛄提取物,每组设平行小室3个,小室浸于24孔板的