文档介绍：硕士学位论文
依达拉奉预处理对大鼠脑干缺血再灌注损伤的保护机制研究
院(系)、所临床医学院
研究生姓名李娇红
学科、专业神经病学
导师姓名李小刚教授
二Ο一二年四月
一、依达拉奉预处理对大鼠脑干缺血再灌注损伤的保护机制研究
中文摘要
目的:目前,医学家们渐渐发现,在缺血性疾病抢救和治疗过程中,对组织
细胞造成损伤的主要因素,不是缺血本身,而是恢复血液再通后,过量的自由基
攻击这部分重新获得血液供应的组织内的细胞造成的,这种损伤,叫做“组织缺
血再灌注损伤”(IR)。脑血管病(VCD)是由各种脑血管病变所引起的局灶性或
弥漫性脑功能缺失为共同特征的脑血管疾病,它是一种常见病、多发病,严重威
胁着人类的健康和生命,其病死率、致残率、复发率均高。在临床脑血管病的分
类中,脑梗死(CI)占 2/3[1]。椎基底动脉闭塞引起的卒中约占缺血性卒中的
20%,它的病死率和致残率均明显较颈内动脉引起的卒中高,其中以脑干梗死危
害最大。依达拉奉作为特异性强效的自由基清除剂,目前已广泛应用于脑缺血再
灌注损伤中,大量临床研究也证实其可清除自由基及由自由基引发的脂质过氧化
抑制脑水肿,引起迟发性神经细胞死亡,从而有效改善神经缺损症状[2,3]。同时
发现,EDA 对机体多种脏器及组织的缺血再灌注损伤有保护作用[4-6]。但有关
EDA 在脑干缺血再灌注损伤过程中的作用机制国内还未见报道,因此本实验采
用大鼠基底动脉第一无分支区和第二无分支区之间的脑干缺血再灌注模型,用
EDA 对大鼠预处理,观察其对大鼠脑干缺血再灌注损伤后 MDA、SOD 等方面
的影响,并探讨研究 EDA 对脑干缺血再灌注损伤的保护作用,为临床应用提供
实验依据。
方法:
1 实验分组和大鼠模型制备
健康清洁级 SD 大鼠 150 只,雄性,月龄 2 个月左右,体重 250g 左右,实
验动物随机分为 3 组,即假手术组(N 组)、缺血再灌注组(IR 组)和依达拉奉
预处理组(E 组)。其中缺血再灌注组根据缺血时间不同分为缺血 1h 灌注 7h
(1hr7h),缺血 2h 灌注 6h(2hr6h),缺血 3h 灌注 5h(3hr5h),缺血 4h 灌注 4h
(4hr4h),缺血 6h 灌注 2h(6hr2h),共 5 个亚组。每个亚组 10 只老鼠。其中 N
组:暴露基底动脉(BA)第一无分支区和第二无分支区,观察 8 小时;IR 组:
暴露基底动脉第一无分支区和第二无分支区,于各个时间点用微型动脉夹夹闭相
应时间缺血再灌注对应时间;E 组:于各亚组实验前 10 分钟于腹腔里注入依达
拉奉 10mg/kg,其他同 IR 组。
2 检测指标及检测方法
各组动物的体重和月龄均在一定范围内
染色
TTC(2,3,5 一氯化三苯基四氮唑)呈脂溶性,对光敏感,是呼吸循环链中吡
啶核苷酸结构酶系统的质子受体,与正常组织细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应
后呈红色,而缺血组织细胞内的琥珀酸脱氢酶活性下降,不能与之反应而使脑组
织呈苍白色【7】。它是评价脑缺血损伤常用指标之一。
HE 染色、光镜观察
N 组观察 8 小时,IR 组及 E 组于术后断头取脑处死大鼠,取脑干组织,置于
10%多聚甲醛中固定,切片 HE 染色,在 200 倍光镜下观察脑干组织的病理改变。
测定脑干组织中丙二醛(MDA)、 NO 含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力
各相应时间点断头取脑处死大鼠后取脑干组织,通过匀浆离心等方法制成
10%的组织匀浆上清液,放在-20℃冰箱里备用。采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧
化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,U/mgprot)活性;采用硫化巴比妥酸(TBA)
比色法检测丙二醛(myeloperoxidase,MDA,nmol/mgprot)含量;采用硝酸还原酶
法检测 NO 含量。以上试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
测定大鼠血浆中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的含量
采用放射免疫法测定 TNF-a 的含量,严格按照试剂盒使用说明来操作并计算
结果
结果:
1 各组动物的体重 250~320g、月龄 2~ 月。
2 TTC 染色
假手术组(N 组)脑干组织为红色;缺血再灌注组(IR 组)正常脑干组织红
色,梗死灶呈苍白色;依达拉奉预处理组(E 组)与相对应时间点的 IR 组比较,
梗死灶苍白色范围缩小。
3 HE 染色、光镜下观察
假手术组(N 组)脑干组织结构未见明显病理改变;缺血再灌注组(IR 组)
神经细胞可见显著坏死,细