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温州医学院硕士学位论文
笫笱9芨苹煌锥位虮泶锲椎谋浠俺醪椒治觥中文摘要目的:探讨笫笱9芨苹牟煌锥位蚱妆泶锏谋浠方法:将只缎坌許笫体重随机分为对照组仃,血管钙化茏组9芨苹茏,每组弧楹蚔组大鼠制作9芨苹P停何肌肉注射危峁哦/溶于花生油灌胃,笾馗垂辔次。组大鼠则予生理盐水肌注渭暗ゴ咳苊交ㄉ图涓艄辔父次。大鼠均普通饮食,相同条件饲养。组和组大鼠于实验第艽λ溃琕组大鼠继续饲养至周处死。分离各组大鼠腹主动脉,分别用染色和旧ǎ鄄煅9钙化的组织学改变。原子吸收分光光度法测定各组大鼠血管组织钙含量。提取各组大鼠血管组织总孀B汲蒫徊胶铣伤磂=用限制性核酸内切酶谐啥潭弁纺┒耍盖泻蟮哪康膁殖两等份,在连接酶作用下分别连上接头和接头,将连有不同接头的组和组大鼠血管组织及楹蚔檠9茏橹直鹱髡此蛞种葡减交杂,得到消减片段,即初步消减文库。在连接酶的作用下将差异表达片段与质粒载体连接成重组肿樱刈樵靥宓既敫惺芴岳┰鑫目狻K婊粞】寺【銹鉴定为阳性克隆后送测序,将测序结果通过与国际公共数据库进行核酸序列同源性检索和对比,分析检索结果。挑选个基因进行原组织验证和醮攵糠治觥结果:橹±砑觳槭綜榇笫蠖鲎橹9苣谄ぜ爸心さΣ阃暾薷蒲沉积;组大鼠动脉中膜变形扭曲,棕褐色钙盐在动脉中膜呈线样沉积,局部弹力板破坏;榇笫蠼细苹橄啾龋约蒲纬粱强杉蒲纬粱为稀疏,并在钙盐沉积处见吞噬细胞。橹撇舛ㄊ綜椤楹蚔组大鼠血管组织钙含量分别为.“痬“痬.“痬榇笫笱9组织钙含量较组明显升高;#组较阬组高表达基因文库榻螩榈捅泶温州医学院硕士学位论文/
基因文库仃畍、榻蟅楦弑泶锘騟目和榻蟅榈捅泶锘騟目经过菌落秆。个消减文库获得鲅粜钥寺。寺∑蔚某ざ仍左右。挑选鲅粜钥寺〕晒Σ庑颉N目经同源性检索和比对最终确定个差异表达基因片段与已知全长基因具有高相似性,这些基因包括、、等,检索基因功能主要涉及骨化,其次有氧化、凋亡等;文库—葱约焖骱捅榷宰钪杖范ú钜毂泶锘蚱觯庑┗包括、龋碌骰蚬δ苤饕S氡嗦階酶、傅扔泄兀晃目葱约焖骱捅榷宰钪杖范ú钜毂泶锘蚱觯‥、、、龋蚬δ苤饕S虢沽姿岷铣伞⒐劝彼嵝藕畔喙兀其次还有部分与氧化还原和凋亡调节有关;文库经比对后最终确定差异表达基因片段个,包括,下调基因功能主要涉及骨化及氧化功能等。蕴粞〉霾钜旎蛟谠橹薪醒橹ぃ琑癉条带灰度值分析提示℃萳龌蚓谠橹中差异表达变化,表达相差平均倍以上,而管家基因诹阶橹械谋泶无明显差异。结论:模型诱导的大鼠血管钙化可以自发性消退。⒃诟苹纬稍缙冢矶喔苹俳虮泶锷系鳎欢苹嗽缙冢矶喔化抑制基因上调,同时伴部分钙化促进基因表达下调。⒏苹种苹虻谋泶镌黾影楦苹俳虻谋泶锵碌骺赡苁茄9芨苹⑸自发性消退的基因学基础。关键词:钙质沉着症;基因文库;模型,动物;.抑制性消减杂交;消退温州医学院硕士学位论文
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大鼠血管钙化不同阶段基因表达谱的变化及初步分析前言调节剂分别能加速大鼠异位钙化的消趔。取血管钙化和慢性肾脏疾病芮邢喙兀9芨苹贑患者中发生率很高,且随病程日趋升高,研究证实平均%的颊叽嬖诓煌潭鹊难9芨化【。颊呓胪肝龊笱9芨苹贤肝銮懊飨栽黾樱篊诘幕颊叻⑸9钙化的比例为%,而进入期的维持透析患者发生血管钙化比例明显升高,血透患者为%,腹透患者为%烙谛难9苁录存在血管钙化【。在透析患者,即使是年轻患者血管钙化发生率也很高【俊S肫胀ㄈ巳合啾龋珻患者的血管钙化具有程度重,进展快,发生年龄轻等特点。流行病学和临床研究发现除一般危险因素如年龄、吸烟、糖尿病、脂代谢紊乱外,激素异常鬃磁韵偎亍⒓状旁腺素相关肽、维生素⒋萍に氐和钙磷代谢紊乱、慢性炎症以及其他因素缡褂昧捉岷霞痢⒏嗡氐都是颊叻⑸9芨苹奈O找蛩亍血管钙化会导致一系列的病理生理改变而使心血管功能异常:钙化血管管壁僵硬,血管顺应性降低,管壁机械应力增加,血管钙化患者临床上表现为收缩压增高,舒张压降低,脉压增大,左室后负荷增加,进而使左室肥厚,