文档介绍：-PAGE测定蛋白质分子量的原理。掌握垂直板电泳的操作方法。(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N,N,N,N—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。分子量范围与凝胶浓度的关系丙烯酰胺浓度(%)线性分离范围(kD)1512~431016~~~212SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS-PAGE测定蛋白质分子量。当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时,电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。凝胶由分离胶和浓缩胶组成:上层为浓缩胶,凝胶孔径较大,没有分子筛效应,,由于快慢离子所形成的高电压梯度,使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层,大大提高了分辨率。下层为分离胶,凝胶孔径较小,有分子筛效应,,变性蛋白质分子所带负电荷基本一致,泳动速度主要决定于分子量。电泳过程中分子迁移的规律,小分子走在前头,::(1)30%丙烯酰胺(2)10%SDS(3)分离胶缓冲液:-(4)浓缩胶缓冲液:-:(5)10%过硫酸铵(APS)溶液(6)四甲基乙二胺(TEMED)(7)SDS上样缓冲液:Tris-HCl、SDS、溴酚蓝、甘油、2-巯基乙醇(8)电极缓冲液(Tris-甘氨酸缓冲液)(9)染色液:甲醇、水、冰乙酸、考马斯亮蓝R250(10)脱色液:甲醇、水、:垂直板电泳装置稳压稳流电泳仪脱色摇床移液枪滤纸大培养皿