文档介绍：《细胞周期》——细胞生物学知识点总结《细胞周期》★细胞的最终命运:细胞分裂及生长(相关物质准备)→细胞增殖(受到严密的调控机制所监控)→细胞死亡★标准的细胞周期:(从G1期开始,历经S、G2,到M期结束)::细胞周期是细胞增殖周期的简称,指细胞从分裂结束后开始生长,到再次分裂终了所经历的全过程。(Tc):细胞周期时间因细胞类型、状态和环境而异,变异范围大,从0h~数年都可能。(机体细胞的状态):1)增殖细胞(周期性细胞):能够增殖,不断进入周期完成分裂。2)暂不增殖细胞(休眠细胞,G0细胞):长期停留在G1晚期(G0期)而不越过限制点,未丧失分裂能力,在适当条件下可恢复到增殖状态。3)永不增殖细胞(终末分化细胞):始终停留在G1期,失去增殖能力直到衰老死亡。细胞周期的研究方法:★细胞周期模型细胞周期研究中经常使用一些典型的物种和细胞系统,最常用的模型包括酵母、爪蟾胚胎细胞和哺乳动物体外培养细胞。★细胞周期同步化——由于实验常常需要设法获得时相均一的细胞群,使样品中的细胞都处于大致相同的细胞周期阶段,所以常需要使细胞周期同步化。同步化的策略:①诱导同步化;②选择同步化同步化常用方法:①细胞分裂收获法②代谢抑制法(加入过量胸苷后清洗)③低温培养法★3H-TdR(氚标记胸苷)有丝分裂标记法(测定细胞周期的时间)——应用3H-TdR短期饲养细胞,数分钟至半小时后,将3H-TdR洗脱,置换新鲜培养液并继续培养。随后,每隔半小时或1小时定期取样,作放射自显影观察分析,从而确定细胞周期各个时相的长短。①通过在光镜下定期计算细胞的数目,并记录全部细胞数目增加一倍所需时间,从而估算出细胞周期的总时间②S、M期的时间可以通过添加氚标记胸苷到培养液中进行测定。★流式细胞技术细胞周期检验点(checkpoint):——检查点是指检查和抑制细胞周期进程的一些特定信号通路,可以检查细胞周期事件的完成情况,控制细胞周期的进度,确保基因组复制和染色体分离的时空独立性,并使细胞能够适应环境变化和机体发育的各种需要。★G1晚期的R点(限制点):R点是G1期细胞能够顺利进入S期的关键,R点受许多因素的影响。其中,生长因子的存在是细胞越过R点的必要条件。机制:生长因子信号途径。★DNA损伤检验点:DNA损伤检查点可以在DNA受损时阻止复制的启动或终止复制,为DNA修复赢得时间。机制:P53依赖途径和非P53依赖途径(P53:多功能转录因子,可以激活Cdk抑制因子P21的基因表达,还可以诱导细胞凋亡。正常情况下P53寿命很短,活性很低,这是因为大多数P53被Mdm2带出细胞核被降解,但在DNA损伤时,激酶ATM/ART可使Mdm2磷酸化而五花结合P53。同时P53也被磷酸化激活并促使P21表达,结合抑制Cdk,使细胞停滞在G1期。)★G2∕S期的DNA复制检验点:DNA复制检验点可检测DNA是否完整复制,以及是否被多次复制。DNA复制检验点持续作用于S期和G2期,使Cdk1保持磷酸化,不能启动M期。DNA损伤严重时,DNA复制检验点将启动细胞凋亡过程。机制:类似于DNA损伤检查点的非P53依赖途径。★中期∕后期的纺锤体组装检验点(分裂检验点):纺锤体组装检验点(分裂检验点)是一种进化上高度保守的机制,它保证中期染色体在赤道面