文档介绍：重庆市腹泻仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验研究
张素辉,曹国文,付利芝,徐登峰,周淑兰,王孝友
(重庆市畜牧科学院荣昌 402460)
摘要:从重庆多个规模猪场采集34份腹泻仔猪粪便样品进行细菌的分离,通过形态学检查、生化鉴定分离到的32株大肠杆菌,并对分离的大肠杆菌菌株进行药物敏感试验,结果显示,氨苄青/舒巴坦、菌必治、先锋必、先锋必素等为其敏感药物。
关键词:腹泻仔猪; 大肠杆菌; 分离; 鉴定;药敏试验
随着养猪业规模化、集约化发展,仔猪细菌性腹泻疾病发病率越来越高,危害也越来越严重。据资料统计,我国仔猪死亡率一般波动在15-25 %之间,2周龄以内死亡率为26%,2-4周龄的死亡率为16%,%【1】,其中70%的死亡被认为是大肠杆菌的作用【2】。仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的一种急性肠道传染病,常见的有仔猪黄痢、仔猪白痢。该病在我国许多地区的猪场都有发生,是危害仔猪的重要传染病之一。随着集约化养猪业的发展,致病性大肠杆菌造成的损失日益明显,已经引起了广泛重视。
笔者对重庆市部分猪场腹泻仔猪进行调查,从流行病学及临床症状分析疑为大肠杆菌引起。从所分离菌株在麦康凯琼脂培养基上长出红色菌落、显微镜镜检以及所做的生化试验结果证明所分离出的细菌为大肠杆菌。目前,防治仔猪大肠杆菌感染性腹泻的较有效手段仍是应用抗生素,但动物长期服用大量滥用抗菌药物,易破坏肠道正常菌群,增加感染性,造成反复感染和继发感染,同时易造成细菌耐药性的增加,因此,针对临床分离的大肠杆菌病原菌进行药敏试验,而指导临床用药具有重要意义。
1. 材料:
病料:腹泻仔猪粪便,采自重庆多个规模化猪场。
培养基及试剂:麦康凯培养基、普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、普通营养肉汤培养基、肠杆菌科细菌微量生化鉴定管,购自杭州微生物试剂有限公司。
药敏纸片:头孢唑啉、菌必治、先锋必、新霉素、氟派酸、丙氟派酸、磺胺甲基异嗯唑、复方新诺明、头孢氨噻肟、恩诺沙星、阿奇霉素、阿莫西林等12种抗生素,购自杭州微生物试剂有限公司。
作者简介:张素辉(1980-),女,硕士,实习研究员。从事动物微生态制剂与新兽药的研究。
2. 方法:
大肠杆菌的分离培养
用灭菌普通肉汤洗涤沾有腹泻仔猪粪便的灭菌棉拭子,接种于麦康凯培养基,37℃培养24h,挑取粉红色的单个菌落,分别划线接种于普通培养基、伊红美蓝培养基进行纯培养;取纯培养菌接种于普通琼脂斜面,37℃培养20h,4℃保存备用。
分离菌形态观察
挑取麦康凯培养基上生长的红色菌落、伊红美蓝平板上的暗黑色带金属光泽的菌落,涂片进行革兰氏染色,光学显微镜镜检观察分离菌株的染色及形态特点。
分离菌生化试验
对细菌进行糖发酵试验、甲基红试验、VP试验、吲哚试验、硫化氢试验、尿素酶试验、枸橼酸盐利用试验。
分离菌药敏试验
各选取分离自每个猪场的大肠杆菌代表株两株(共10株)进行药物敏感性试验,编号分别为:4586、4591、5677、5679、4667、4671、4518、4526、4571、4656。用灭菌棉拭子蘸取分离菌的肉汤培养物,均匀涂布接种于普通琼脂培养基,待稍干后,用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴于培养基表面,37℃培养12-18h后,测定抑菌环的大小。判