文档介绍：题目:蛋白质沉淀反应一、实验目的掌握几种使蛋白质沉淀的方法;掌握蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的区别;理解蛋白质变性和沉淀的关系。蛋白质沉淀反应(一)蛋白质的盐析作用(二)乙醇沉淀蛋白质(三)重金属盐类沉淀蛋白质(四)生物碱试剂沉淀蛋白质(一)蛋白质的盐析作用加盐类如硫酸铵、硫酸钠、***化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜,同时又中和了蛋白质分子的电荷,因此使蛋白质产生沉淀,这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象称盐析。盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加,实验时要加足够量的盐。蛋白质的盐析作用是可逆过程,用盐析方法沉淀蛋白质时,较少引起蛋白质变性,经透析或用水稀释时又可溶解。(二)乙醇沉淀蛋白质有机溶剂如酒精、***等可使蛋白质产生沉淀,这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用,破坏了蛋白质分子周围的水膜,因此发生沉淀作用。若及时将蛋白质沉淀与***或乙醇分离,蛋白质沉淀则可重新溶解于水中。(三)重金属盐类沉淀蛋白质溶液pH在蛋白质等电点以上时,重金属盐类(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀。重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全,故常用重金属盐除去液体中的蛋白质。但应注意,在使用某些重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉淀蛋白质时,不可过量,否则将引起沉淀再溶解。此时的溶解为生成憎水胶体的缘故。(四)生物碱试剂沉淀蛋白质生物碱是植物中具有显著生理作用的—类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀,或能与生物碱作用产生颜色反应的物质,称为生物碱试剂。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时,蛋白质为阳离子,能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀,其中以三***醋酸的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首选沉淀剂,只能沉淀蛋白质,不能沉淀其水解产物,加热可除去。三、实验材料实验材料:鸡卵清蛋白液,吸管(1mlx4,2mlx4,,5mlx2),试管(),水浴锅,滴管,电炉实验试剂:苯酚(%),硫酸铜(1%),硫酸铵固体,95%乙醇,NaCl,醋酸铅,鞣酸,苦味酸,冰醋酸四、操作步骤