文档介绍：广东药学院
硕士学位论文
WD患者ATP7B基因突变热点及其与临床表型相关性研究
姓名:黄叶青
申请学位级别:硕士
专业:内科学
指导教师:洪铭范
2011-05
广东药学院硕士研究生学位论文
患者基因突变热点及其与临床表型相关性研究
研究生:黄叶青
导师:洪铭范教授
摘要
课题背景:
肝豆状核变性(Hepatolenticular degeneration, HLD)又名Wilson 病(Wilson’s
disease, WD),是一种常染色体隐性遗传性铜代谢障碍性疾病。临床主要表现为血清
铜蓝蛋白减低、肝硬化、进行性加重的锥体外系症状、角膜色素环、精神症状等。
WD基因存在高度的遗传异质性,且突变热区和高频突变位点具有区域、种族差异性。
目前,关于WD患者基因型和临床表型之间的关系存在很大的争议。本研究采用变性
高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)技术对
WD患者进行基因检测,并探讨基因型和表型之间的关系。
目的
采用快速、高效的 DHPLC 对 WD 患者进行基因检测,寻找中国人 WD 患者新的
基因突变热区和高频突变位点,为建立可用于临床的快速、简便的基因诊断方法奠定
基础;并研究中国人 WD 患者基因高频突变位点的基因型、基因突变类型与临床表型
的关系。
方法:
1. 采用 DHPLC 检测来自 72 个不同家系的 75 例 WD 患者及其家属样本 171 例
的 ATP7B 基因,其中包括 144 例双亲和 27 例同胞。以 200 名正常健康人为对照。
2. 收集上述 WD 患者的临床资料、基因检测结果,以 ATP7B 基因的第 8、16 号
外显子 Arg778Leu和 Ile1148Thr 突变作为基因型,以错义突变和非错义突变作为突变
类型,将患者的性别、发病年龄、病程、临床分型、首发症状及血清铜和血清铜蓝蛋
白检测结果等临床表型作为比较的指标,探讨中国人 WD 患者高频基因突变位点的基
因型与临床表型的关系。
结果
1. 75 例 WD 患者 ATP7B 基因的 21 个外显子经 DHPLC 检测出 53 种不同的峰形
图。
I
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2. 经 DNA 测序证实,75 例 WD 患者共检出 13 种多态和 38 种突变,包括 24 种
错义突变、 5种无义突变、3 种剪接突变、6 种移码突变。并首次报道 2 种新多态:
1839C>T(Ile613Ile), 2922G>A (Trp974Trp),及 10 种新突变(200 例正常对照未发现
相同形式的基因型): 1875-1876dupAATT, 2120A>G(Gln707Arg), 2121+3A>T,
2564C>A(Ser855Tyr) , 2620G>C(Ala874Ser), 2761A>C ( Ser921Arg ) , 3236G>T
(Cys1039Phe), 3244-2A>C, 3446G>A(Gly1149Glu), 3682A>T(Arg1228stop)。
3. 75 例 WD 患者突变总的检出率为 %(68/75),基因突变频率为 %
(103/150), Arg778Leu突变的检出率为 %(32/75),染色体突变频率为 %
(34/150), Ile1148Thr 突变的检出率为 %(14/75),染色体突变频率为 %
(14/150),第 8、12、16 号外显子基因突变总的检出率为 48%(72/150)。
4. 75 例患者中,ATP7B 基因突变类型与患者的血清铜和血清铜蓝蛋白检测结果
无显著性差异(P>); 无 Arg778Leu 突变组的血清铜水平低于 Arg778Leu 杂合突
变组,有显著性差异(P=),无 Arg778Leu突变组的血清铜水平低于 Arg778Leu
纯合突变组,有显著性差异(P=);Ile1148Thr 杂合突变组的血清铜蓝蛋白水平
高于无 Ile1148Thr 突变组,有极显著性差异(F=,P=)。
5. 75 例患者中,Ile1148Thr、Arg778Leu、ATP7B 基因突变类型与患者的性别、
发病年龄、病程、临床分型、首发症状等临床表型之间均无显著性差异(P>)。
结论
DHPLC 是一种可用于临床的快速、简便的基因诊断方法;Ile1148Thr 突变是中国
人 WD 患者 AT