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新型重组人内毒素结合肽突变体的设计与构建.pdf

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文档介绍:论文作者签名:社日期:礁乌丝巫旦指导教师签名::三冬越选期:冱嫔ǘ恢恋第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
英文缩写一览表⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯论文正文新型重组人内第一部分重组人内实验材料⋯⋯⋯实验方法⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯论⋯⋯⋯第二部分重组人内果⋯⋯⋯全文总结⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯文献综述内毒素拮抗肽攻读硕士学位期间发表的讨结刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯.—一’·
英文缩写一览表英文缩写英文全称中文全称碱基对分化群脱氧核糖核酸双蒸水乙二胺四乙酸克辣根过氧化物酶白介素一籇—丙基硫代一肴樘擒千道尔顿脂多糖脂多糖结合蛋白鲎抗内毒素因子摩尔浓度毫升光密度逆转录多聚酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基磺酸钠/痁岬缬净撼逡三羟甲基氨基甲烷互补决定区小时卡那霉素培养基疞分钟分子量第二军医人学硕十学位论文一—
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新型重组人内毒素结合肽突变体的设计与构建摘要研究背景和目的脂多糖结合蛋白琇且恢纸榈糒与其受体相结合的关键载体蛋白分子。其羧基末端将莩手潦芴錍⒁复合体形式启动一籑活化及跨膜信号转导,从而激活下游信号转导通路。多项研究表明:和等天然蛋白的衍生肽均具有中和内毒素能力,且可以通过阻断狶的结合来抑制辗⒌奶迥谕庋字⒎应。同时,它们具有一共同特点,即与岷锨蚓缓绾杉笆杷园被岵基。肿咏峁怪泻写旱绾傻牧姿峄偶笆杷猿ち粗舅幔菀捉岷洗荷及疏水性分子。因此,我们可以通过氨基酸替换来增加阳性电荷数和疏水性,从而增加这类小分子肽的拮抗内毒素活性。然而由于不同的氨基酸残基所带电荷及疏水性均不同,任意一个残基的替换都可能会使肽的电荷、疏水性乃至空间结构发生改变,所以,我们需了解此肽段中哪些氨基酸是与岷系墓丶坏悖⒀≡癯庑┕丶基酸之外的位点进行突变,即把非关键氨基酸替换成疏水性、碱性氨基酸或重要结合位点氨基酸。、碱性氨基酸的第位氨基酸,与带有负电荷的磷酸基团及疏水性长链脂肪酸的内毒素分子有着高效亲和力。因此,本研究针对内毒素分子结构特征,在本课题组以往研究中已证实肽段,即内毒素结合肽具有一定中和内毒素活性能力的基础之上,为进一步提高其生物活性,我们对因片段进行改建,在构建表达载体的同时,选择可能影响其生物活性的氨基酸所对应的碱基进行突变,以期增强其抗内毒素活性,通过分子克隆、定点突变和表达纯化获得重组人内毒素结合肽突变体,为研究该肽段的功能奠定了基础。主要技术方法以本实验室已有的一刈橹柿ND0澹捎肞法,扩增颍构建一诤媳泶镌靥宀⒆;疎.┰觥V刈橹柿>盖泻筒庑蚣定后,应用快速定点突变法将位缬氨酸、第还劝滨0贰⒌槐奖酸、第位天冬酰胺和第位天冬氨酸所对应的碱基依次替换成赖氨酸、赖氨酸、第三军医大学硕士学何论文珽狶—

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