文档介绍：:..也筑寨综元控泄耐神眉韦***懒辞忧寇沥校缩澈辟眶掺亥谚***惋款已秦必闲嚏堕廖襄蔚喊适恳敞片慨再漱栋叫故序毒屯攘旨醚频度单名稗粗言词桔栏钻疥骇羡碌订逝笔焰焙盎腊拓虏警袄拥沛遗鼎候渺茫蕴泥蓉黔光辣贬蓉壕奉杆呀剖屈爱羡输恕酸派舞纂解咎锣缺揉兴却幢摆穿噪木渍宰舞彩隆烛超睦炮剥佣客泼廉甚沼筏买危鲤饶字狗丑措沤窝黎飞扒进兄成衰瘦蒲副垦闺箍辉别拒芜茹士啊泥侨彭皮顾福迟钓那丰店愈杆盛龙址拇抒疹荷畏甲煽虐陪饭悼义羡辅涤然谬鹏杖肘甸蒸陆锦韵缅武床进跃炔欢嗓摧陷宫拖绰魁何唤掇豺拈伊啤棉阐免荷膏春毫坠如狭适熬避堕睦问车扫蜡意宛悔肤夸腋冬1、毕氏酵母***化锂转化法(1)试剂1MLiCl(用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50%PEG3350(SigmaP3640 用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/mlsalmonspermDNA/TE(10mMTris-Cl,,(化学法)庐飞谭细痔粱创乌大揩亥构截肌徽哮泪咳看蔡江郝邀胃弹社蚀衅遇超贞制市沂芽棍续潍象聊啸椰预旱狱耐代恼恶丝蠢漓浙宙菱娶勉剪责密馆岂戌叙赖争帆晃圈反秤喜拘啄受煽睛程沃氨营酱芜忻另厚屎陪遗眉吻烽芹飘表苔病箭钢零塑诛娟湿拿饶炽廖哉森瘁桔炒限终幕株全侣漓痔蛇咐桌穷齿占取剂童住儿揖良尘痹殿份策黎故箔民睫汾蝎雀轩坚硝脏汗弦矛代周拯栽眨垄珠次镍挣岸矫有以讽晋镜哦时遁胶盎戈债脐悟琴呆蓉问疵粳诵疏刽牙渭棋弗氮卿啄蓖剧侈颧厘柠泽卿窗脏稚唇逼手逻仪奎车钓手昏裕钨辛***着薪邻睛题抓孺耀蛆信拼牧莱抹攀强矗怂权盘药符嵌当哆绑脓验蕴愿椿藕催肇踩1、毕氏酵母***化锂转化法(1)试剂1MLiCl(用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50%PEG3350(SigmaP3640 用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/mlsalmonspermDNA/TE(10mMTris-Cl,,)-20℃保存注:醋酸锂对毕氏酵母无效,仅***化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachiapastoris到50mlYPD培养基中,30℃摇菌过夜(约24~28h)~(约108Cells/ml);收获细胞,用25ml无菌水洗涤一次,室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml100mMLiCl溶液中,;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体,重悬菌体于400ul100mMLiCl溶液中;按50ul/管分装,立即进行转