一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法.doc

文档介绍：一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1MTris-HCl(,,)组份浓度 1MTris-HCl配制量 1L配制方法 。,充分搅拌溶解。。  。,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,。-HCl()    组份浓度 -HCl配制量  1L配制方法 。,充分搅拌溶解。。。,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,。10×TEBuffer(,,)   组份浓度 100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量  1L配制方法 ,置于lL烧杯中。1MTris-HClBuffer(,,)100ml500mMEDTA()20ml  ,均匀混合。,高温高压灭菌。。3M醋酸钠()      组份浓度 3M醋酸钠配制量  100ml配制方法 ·3H2O置于100~200ml烧杯中,加入约40ml的去离子水搅拌溶解。。。,室温保存。PBSBuffer      组份浓度 137mMNaCl,,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量  1L配制方法 ,置于lL烧杯中。  ,充分搅拌溶解。,然后加入去离子水将溶液定容至1L。,室温保存。注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,。10M醋酸铵  组份浓度 10M醋酸铵配制量  100ml配制方法 ~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。。。,室温保存。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚  配制方法 :大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须,160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl(),使用磁力搅拌器搅拌l5min,静置使其充分分层后,除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤-HCl()。使用磁力搅拌器搅拌l5min,静置使其充分分层后,除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。⑦。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/***仿/异戊醇 配制方法 :从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚,***仿/异戊醇(25:24:1)。***仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气