文档介绍：实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理糖类包括多糖、双糖和单糖,其中单糖和某些双糖具有游离的羰基,称为还原糖,多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性,与斐林试剂(氧化剂)中的二价铜离子还原为一价铜,进行氧化还原反应,,再进行测定。斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂,反应的终点可用次甲基蓝作指示剂,在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量,计算出样品还原糖量。二、试剂与材料1、斐林试剂甲 1000ml 50ml/组乙 346g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000ml 50ml/组2、1%次甲基蓝 1g次甲基蓝+100ml水/班棕色瓶保存3、%标准G 2gG105℃烘干到恒重加水到1000ml 2000ml/班4、碱式滴定管5、样品溶液:待测G液样品1:稀释20倍,1000ml /班样品2:稀释50倍,1000ml /班6、电炉三、操作方法1、斐林试剂标定A 取甲液5ml+乙液5ml,(注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶)置于250ml三角瓶中,加入10ml水,%的标准G若干毫升(约23ml)。(-)B 电炉上加热至沸,并保持微沸2分钟,加2滴1%次甲基蓝溶液,%标准G滴定至蓝色消失,有红棕色沉淀,溶液清亮为终点止。记录耗用的G量为V0,必须在1min内完成。注意:还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。2、定糖预备试验同1法取斐林试剂,加10ml样品液,摇匀于电炉上加热至沸,保持微沸2分钟,加2滴1%次甲基蓝,%G滴定至蓝色消失。记录耗用的G量为V13、样品中还原糖测定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释),补加(V0—V1)ml水,并从滴定管中预先加入(V1-1)ml %G,摇匀至电炉上加热至沸,保持2min微沸,加入2滴1%次甲基蓝,继续用G滴定至蓝色消失。记录消耗的标准G体积为V毫升。四、结果计算还原糖含量(以G计) ( g/ml) =(Vo-V) * *1/10 * n式中Vo-------- 斐林试剂标定值,ml V--------- 样品糖液测定值,ml ----- 标准GS液浓度,g/ml 10-------- 样品糖液体积,ml n--------- 样品稀释倍数